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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助急急急
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dingyanhua

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助急急急已有3人参与

大家好，我现在做的是连接，载体是pet32a，片段大约300bp（PCR产物）分别用ECOR1和Hind3双酶切后割胶纯化亮度也可以，做过好几次连接都不长斑，连接体系尝试过好种都不行，两个酶是没有问题，之前连接进去一个，剩下的几个样就再也连不上了。感受态也没有问题，因为对照是没问题的。
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1楼2010-08-02 14:19:06
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dingyanhua

铜虫 (小有名气)
连出几个来了，可能是连接体系的问题。以前用的连接体系现在不太好用了，可能是目的片段太小了
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4楼2010-08-04 07:39:56
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muchong5577

金虫 (正式写手)
dingyanhua(金币+1): 2010-08-04 07:38:32
是不是连接酶失效了、平板拿错了抗性的？
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2楼2010-08-02 15:14:53
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被太阳追逐

新虫 (初入文坛)
★
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-08-02 17:02:00
dingyanhua(金币+1): 2010-08-04 07:38:51
dingyanhua(金币+1): 2010-08-13 08:53:19
pcr片段连个t载测下序吧，看一下引物是否正确，之前试验室出现过一个情况，就是引物合成时给缺失了一个碱基，一个克隆做了很久没做出来。要是这没错就只能多做几次啦。
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3楼2010-08-02 15:35:43
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
dingyanhua(金币+1): 2010-08-13 08:53:04
300bp的链接效率比较低。你可以考虑提高酶切片段的浓度，或者链接在T载体上，然后酶切在连到你目的载体上。。
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5楼2010-08-11 19:56:56
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