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dqvictory

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】连接产物,是否可以直接做PCR模板? 已有10人参与

请教各位大侠:
    T4酶要不要先灭活其中的T4连接酶?Buffer中的离子对PCR反应有影响吗?如果需要的话,要怎样进行纯化呢?
    谢谢啦!
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-27 13:37:47
是可以的,但是其中一条引物要用载体上的序列来设计,通常用载体上的通用引物来做,另一端可以选载体上的序列,也可以选插入片段远端的序列来做。

祝好运
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
7楼2010-10-27 13:35:49
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
连接产物为什么要直接做PCR呢…………我倒是好奇这个问题
2楼2010-10-27 12:42:17
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ben1147

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-27 12:42:17:
连接产物为什么要直接做PCR呢…………我倒是好奇这个问题

估计是想看看有没有连上的,要是没连上就不做转化了,毕竟转化比较费时间,哈哈
3楼2010-10-27 12:48:30
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):good! 2010-10-27 19:56:18
PCR产物3‘是羟基,载体5’是磷酸,这个地方是连上的。PCR产物5‘是羟基,载体的3’也是羟基,这个地方应该是没连上的吧,不知道Taq酶能不能过去,我瞎猜的哈
4楼2010-10-27 12:51:26
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