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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物作为模板
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双螺旋DNA

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR产物作为模板 已有1人参与

我扩增一个比较小的片段85bp，加基因组DNA扩增良好，
现在用PCR产物分别作1，10,100倍稀释，取1微升作为25微升体系模板，怎么扩不出来，是不是还要继续稀释？谢帮助……
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1楼 2010-10-17 20:19:52
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green1223

木虫 (职业作家)
你是说你以基因组为模板 扩增85bp的DNA吗  效果怎么样？
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2楼2010-10-17 20:41:28
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
你用产物扩增什么？ 这一步目的是什么？
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3楼2010-10-17 20:52:30
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linysm

银虫 (小有名气)
你说用基因组扩可以扩出，你验证过确保不是引物聚合体？一般PCR产物做模板更好扩啊。
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4楼2010-10-17 21:33:44
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天龙n部

金虫 (小有名气)
一般不用PCR产物作模板啊，把他练到载体上再P下，试试
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5楼2010-10-17 21:37:22
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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)
双螺旋DNA(金币+5): 2010-10-18 09:51:43
PCR产物做模板要稀释最少100倍的，前面的低稀释倍数应该P不出来
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6楼2010-10-17 23:27:26
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双螺旋DNA

金虫 (正式写手)
感谢各位，我将PCR产物继续稀释到1000或更高，昨晚已近P出来了
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7楼2010-10-18 09:52:52
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双螺旋DNA

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by green1223 at 2010-10-17 20:41:28:
你是说你以基因组为模板 扩增85bp的DNA吗  效果怎么样？

效果挺好的
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8楼2010-10-18 09:53:40
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双螺旋DNA

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2010-10-17 20:52:30:
你用产物扩增什么？ 这一步目的是什么？

有两个，其一是我胶回收纯度比较不好，用产物重新扩一下；其二，为了验证我的产物是正常的目的产物。谢谢~~
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9楼2010-10-18 09:55:19
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双螺旋DNA

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by linysm at 2010-10-17 21:33:44:
你说用基因组扩可以扩出，你验证过确保不是引物聚合体？一般PCR产物做模板更好扩啊。

与无模板对照明显，不是二聚体，问题已解决，谢谢~
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10楼2010-10-18 09:56:21
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