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双螺旋DNA

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR产物作为模板 已有1人参与

我扩增一个比较小的片段85bp,加基因组DNA扩增良好,
现在用PCR产物分别作1,10,100倍稀释,取1微升作为25微升体系模板,怎么扩不出来,是不是还要继续稀释?谢帮助……
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green1223

木虫 (职业作家)

你是说你以基因组为模板 扩增85bp的DNA吗  效果怎么样?
2楼2010-10-17 20:41:28
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)

你用产物扩增什么? 这一步目的是什么?
3楼2010-10-17 20:52:30
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linysm

银虫 (小有名气)

你说用基因组扩可以扩出,你验证过确保不是引物聚合体?一般PCR产物做模板更好扩啊。
4楼2010-10-17 21:33:44
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天龙n部

金虫 (小有名气)

一般不用PCR产物作模板啊,把他练到载体上再P下,试试
5楼2010-10-17 21:37:22
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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

双螺旋DNA(金币+5): 2010-10-18 09:51:43
PCR产物做模板要稀释最少100倍的,前面的低稀释倍数应该P不出来
6楼2010-10-17 23:27:26
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双螺旋DNA

金虫 (正式写手)

感谢各位,我将PCR产物继续稀释到1000或更高,昨晚已近P出来了
7楼2010-10-18 09:52:52
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双螺旋DNA

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by green1223 at 2010-10-17 20:41:28:
你是说你以基因组为模板 扩增85bp的DNA吗  效果怎么样?

效果挺好的
8楼2010-10-18 09:53:40
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双螺旋DNA

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2010-10-17 20:52:30:
你用产物扩增什么? 这一步目的是什么?

有两个,其一是我胶回收纯度比较不好,用产物重新扩一下;其二,为了验证我的产物是正常的目的产物。谢谢~~
9楼2010-10-18 09:55:19
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双螺旋DNA

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by linysm at 2010-10-17 21:33:44:
你说用基因组扩可以扩出,你验证过确保不是引物聚合体?一般PCR产物做模板更好扩啊。

与无模板对照明显,不是二聚体,问题已解决,谢谢~
10楼2010-10-18 09:56:21
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