应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】3'RACE求助
161/2返回列表12下一页
查看: 1756  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lianyi1989

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】3'RACE求助

最近在做两条基因的RACE，一条已经搞定，另外一条5'也已经出来了，但是3'却一直卡着，卡了一个月了~这个3'已经出条带了，但是测序总不对，有polyA和UPM，但是找不到上游引物，和原来的序列也拼接不上，重做了两次，测序结果都是这样...然后就重新设计引物，已经5条了，但是就是弥散，连条带都没有了~ cDNA应该是没问题的，因为另外一条基因都出结果了，用的clontech的smarter的盒子，程序和体系都是按说明说上推荐来的，也应该不会有什么问题，现在真不知道是哪有问题，请各位虫友们给给意见，急死了~另外，我这3'真是做不出来的话，有没有别方法可以得到全长？我的基因全长是1600bp左右，现在已经得到了1200多了，就差3'那边的300—400bp的了。谢谢大家啦~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-10-04 20:36:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
★
lianyi1989(金币+1):谢谢参与
用inner扩下，或者用polyT试试，不行tail也做做
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-10-04 21:45:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbcai321
★
lianyi1989(金币+1):谢谢参与
3楼2010-10-04 21:52:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lianyi1989

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lhwei1987 at 2010-10-04 21:45:43:
用inner扩下，或者用polyT试试，不行tail也做做

谢谢，不过能不能详细说明下，不是很懂~ps：我是新手...无限感激了
赞一下 回复此楼
4楼2010-10-05 10:29:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大白菜123789

铜虫 (小有名气)
★
lianyi1989(金币+1):谢谢参与
换引物，找保守区的引物试试！
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-10-05 15:39:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

booew

新虫 (初入文坛)
★
lianyi1989(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by lianyi1989 at 2010-10-04 20:36:02:
最近在做两条基因的RACE，一条已经搞定，另外一条5'也已经出来了，但是3'却一直卡着，卡了一个月了~这个3'已经出条带了，但是测序总不对，有polyA和UPM，但是找不到上游引物，和原来的序列也拼接不上，重做了两次 ...

用两条特异引物做巢式
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-10-05 16:09:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

suguolian

新虫 (初入文坛)
★
lianyi1989(金币+1): 谢谢参与
我做的是3’-RACE，用的invitrogen的M-MLV RT反转录试剂盒做，引物是特异性引物与oligo dT加尾，这样能做出来吗？求各位虫友帮忙……不胜感激
赞一下 回复此楼
7楼2013-09-11 10:25:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雙子の殇

金虫 (正式写手)
★
lianyi1989(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
7楼: Originally posted by suguolian at 2013-09-11 10:25:02
我做的是3’-RACE，用的invitrogen的M-MLV RT反转录试剂盒做，引物是特异性引物与oligo dT加尾，这样能做出来吗？求各位虫友帮忙……不胜感激

多长的片段？我之前做出来三千多的，用半套式做的

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2013-09-12 00:19:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

suguolian

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 雙子の殇 at 2013-09-12 00:19:52
多长的片段？我之前做出来三千多的，用半套式做的
...

200-300左右吧！后面换了Takara的3‘RACE试剂盒也没结果，请楼主多多指导！！！
赞一下 回复此楼
9楼2013-09-29 08:51:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雙子の殇

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by suguolian at 2013-09-29 08:51:06
200-300左右吧！后面换了Takara的3‘RACE试剂盒也没结果，请楼主多多指导！！！...

那么短应该很容易啊，你确定它有polyA吗？如果有，设计一个好的上游引物一下就出来了，或者设计两个上游引物做一下半套式

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

liubolin945
10楼2013-09-29 09:35:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lianyi1989 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 322求调剂 +3 熊境喆 2026-03-01 3/150 2026-03-02 08:44 by houyaoxu
[考研] 0856材料与化工，270求调剂 +7 YXCT 2026-03-01 7/350 2026-03-02 08:29 by houyaoxu
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +4 pin8023 2026-02-28 6/300 2026-03-02 06:35 by 汪！？！
[考研] 292求调剂 +6 yhk_819 2026-02-28 6/300 2026-03-01 23:23 by 向上的胖东
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 0805总分292，求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 化工专硕342，一志愿大连理工大学，求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭