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lianyi1989

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】3'RACE求助

最近在做两条基因的RACE，一条已经搞定，另外一条5'也已经出来了，但是3'却一直卡着，卡了一个月了~这个3'已经出条带了，但是测序总不对，有polyA和UPM，但是找不到上游引物，和原来的序列也拼接不上，重做了两次，测序结果都是这样...然后就重新设计引物，已经5条了，但是就是弥散，连条带都没有了~ cDNA应该是没问题的，因为另外一条基因都出结果了，用的clontech的smarter的盒子，程序和体系都是按说明说上推荐来的，也应该不会有什么问题，现在真不知道是哪有问题，请各位虫友们给给意见，急死了~另外，我这3'真是做不出来的话，有没有别方法可以得到全长？我的基因全长是1600bp左右，现在已经得到了1200多了，就差3'那边的300—400bp的了。谢谢大家啦~

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1楼2010-10-04 20:36:02

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liubolin945

铁虫 (小有名气)

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★
lianyi1989(金币+1): 谢谢参与

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引用回帖:

10楼: Originally posted by 雙子の殇 at 2013-09-29 09:35:07
那么短应该很容易啊，你确定它有polyA吗？如果有，设计一个好的上游引物一下就出来了，或者设计两个上游引物做一下半套式
...

你好，想请教你个问题，关于3race的
我现在有个全场大约4700的片段，现在P出300bp，3‘端有3000bp，想race出来。
但是用takara的试剂盒没成功，低温时候有错配（错配的是Outer Primer），高温时候无条带。
用Oligo dT反转录，再进行PCR就弥散，无条带。
请问该怎么进行优化？谢谢