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suguolian

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 雙子の殇 at 2013-09-29 09:35:07
那么短应该很容易啊，你确定它有polyA吗？如果有，设计一个好的上游引物一下就出来了，或者设计两个上游引物做一下半套式
...

恩，好的！我的是昆虫，怎么知道是否有poly A呢？是 要检测总RNA的质量吗？
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11楼2013-09-30 09:36:22
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雙子の殇

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by suguolian at 2013-09-30 09:36:22
恩，好的！我的是昆虫，怎么知道是否有poly A呢？是 要检测总RNA的质量吗？...

我做的时候没有检测
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12楼2013-09-30 09:39:01
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liubolin945

铁虫 (小有名气)
★
lianyi1989(金币+1): 谢谢参与
送红花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by 雙子の殇 at 2013-09-29 09:35:07
那么短应该很容易啊，你确定它有polyA吗？如果有，设计一个好的上游引物一下就出来了，或者设计两个上游引物做一下半套式
...

你好，想请教你个问题，关于3race的
我现在有个全场大约4700的片段，现在P出300bp，3‘端有3000bp，想race出来。
但是用takara的试剂盒 没成功，低温时候有错配（错配的是Outer Primer），高温时候无条带。
用Oligo dT反转录，再进行PCR就弥散，无条带。
请问该怎么进行优化？谢谢
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QQ：277046172
13楼2015-08-26 14:39:24
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雙子の殇

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by liubolin945 at 2015-08-26 14:39:24
你好，想请教你个问题，关于3race的
我现在有个全场大约4700的片段，现在P出300bp，3‘端有3000bp，想race出来。
但是用takara的试剂盒 没成功，低温时候有错配（错配的是Outer Primer），高温时候无条带。
用O ...

不好意思，放假回家，现在刚看到，我没有用过takara的试剂盒，我做的病毒有poly A，如果你的也有的话，在300bp片段里面设计两个上游引物，配合OLIGO DT用半套式PCR做一下试试.
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14楼2015-09-05 19:49:35
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liubolin945

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 雙子の殇 at 2015-09-05 19:49:35
不好意思，放假回家，现在刚看到，我没有用过takara的试剂盒，我做的病毒有poly A，如果你的也有的话，在300bp片段里面设计两个上游引物，配合OLIGO DT用半套式PCR做一下试试....

是的，我也是这样做的，但是两轮PCR 都是弥散，看不见条带。
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QQ：277046172
15楼2015-09-08 08:37:01
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雙子の殇

金虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by liubolin945 at 2015-09-08 08:37:01
是的，我也是这样做的，但是两轮PCR 都是弥散，看不见条带。...

那你就切目的条带那一块的回收克隆测序
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16楼2015-09-09 08:38:53
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