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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】困惑
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asdfghjkl-00

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】困惑 已有5人参与

我用的是PMD18-T载体，长度为2692bp，插入片段在500左右，但是跑胶出的条带在5000左右。。。。。请问这是怎么回事啊？很困惑啊。。。。。
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1楼 2010-09-27 14:01:10
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魑魅-魍魉

新虫 (正式写手)
是不是楼主东西里面有杂质啊？还是胶的问题，再检查检查
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风中摇曳的颤枝，何处是归根？
2楼2010-09-27 16:23:06
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houjinglhy

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测序不就知道了吗 有可能是maker被你看错了
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
3楼2010-09-27 16:37:52
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asdfghjkl-00

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 魑魅-魍魉 at 2010-09-27 16:23:06:
是不是楼主东西里面有杂质啊？还是胶的问题，再检查检查

我的DNA是割胶回收的，可能回割下一些胶，会不会有影响？胶应该是没有问题。。。
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4楼2010-09-28 09:50:46
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asdfghjkl-00

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by houjinglhy at 2010-09-27 16:37:52:
测序不就知道了吗 有可能是maker被你看错了

marker跑的是线性DNA，如果我们连接成功，应该是环状的，环状和线性DNA的电泳结果会不会不一样啊？
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5楼2010-09-28 09:52:43
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houjinglhy

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Originally posted by asdfghjkl-00 at 2010-09-28 09:52:43:

marker跑的是线性DNA，如果我们连接成功，应该是环状的，环状和线性DNA的电泳结果会不会不一样啊？

会的 但双螺旋只会跑更快 不可能有5000吧 3000BP 跑出来小于2000都有可能
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
6楼2010-09-28 10:27:05
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
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连接转化后的克隆，经PCR鉴定后摇菌提质粒，酶切后电泳鉴定。
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
7楼2010-09-28 10:30:55
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)
★
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提取的质粒直接跑电泳不能说明问题，单酶切后跑电泳，或双酶切鉴定。如果测序用的话，用M13菌落 能扩出来，一般可以不用双酶切鉴定。
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8楼2010-09-28 14:16:39
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