应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】继续连接问题
101/1返回列表
查看: 1449  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看

j2

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】继续连接问题 已有8人参与

我用宝生物的连接试剂盒中solution1进行载体和基因的连接，pmol比在1：5的样子，连接3小时，由于其说明书上说连接产物可直接电泳，我取了5ul进行了电泳，发现原载体3600bp，基因2000bp处无条带，在5000bp以下出现了弥散带。不知道是怎么回事？
之前的转化也没筛到阳性克隆。很困惑~~~想请教高手，该怎么办？

marker:7000，5000，3500，2000，1000，500
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
1楼 2010-04-22 14:18:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pwj

银虫 (小有名气)
我感觉还是连接完了做转化好点！
赞一下 回复此楼
2楼2010-04-22 17:30:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by pwj at 2010-04-22 17:30:06:
我感觉还是连接完了做转化好点！

就是转化没结果，我不知道什么原因，就直接拿连接液电泳看看，结果就这个样子，很苦恼啊~
赞一下 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
3楼2010-04-22 18:21:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lij2
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
4楼2010-04-23 19:50:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
强烈建议你先把原载体和目的基因先电泳检测一下！
你每次回收完片段都检测了吗？不要以为理所当然是好的
有时候不尽然
赞一下(2人) 回复此楼
终于熬成木虫了……
5楼2010-04-24 07:05:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

螺旋技术

新虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
属于正常现象。
回复此楼
6楼2010-04-24 11:45:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 螺旋技术 at 2010-04-24 11:45:08:
属于正常现象。

正常现象是指连上还是没连上啊？
赞一下 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
7楼2010-04-24 12:28:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

露露sw

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone: 记得关注啊 2011-09-19 19:25:31
我也是同样的问题啊？
赞一下(2人) 回复此楼
加油！忙碌的工作者们！
8楼2011-09-19 15:17:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

另一个天堂

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(MolEPI+1): 不错 2011-09-19 19:25:19
1.建议延长连接时间，我一般过夜（12h）
2.把原载体DNA验证一下，看有没有
3.仔细检查每一步实验
赞一下(3人) 回复此楼
9楼2011-09-19 18:02:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(MolEPI+1): 来也 2011-09-19 19:25:04
像你这种连接产物直接电泳其实也可以，但是并不是完全可靠的。。。
按照你图中的图和你所描述的，有可能是连接上了！因为重组载体一般比线性的要小一些；
你可以将连接产物转化一下，这样质粒拷贝数就会很高，然后提取质粒酶切验证，也比较利于你进行连接验证。。。。
祝好运！

[ Last edited by 天使托 on 2011-9-19 at 19:05 ]
赞一下(3人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
10楼2011-09-19 19:04:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 j2 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭