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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】继续连接问题
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j2

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】继续连接问题 已有8人参与

我用宝生物的连接试剂盒中solution1进行载体和基因的连接，pmol比在1：5的样子，连接3小时，由于其说明书上说连接产物可直接电泳，我取了5ul进行了电泳，发现原载体3600bp，基因2000bp处无条带，在5000bp以下出现了弥散带。不知道是怎么回事？
之前的转化也没筛到阳性克隆。很困惑~~~想请教高手，该怎么办？

marker:7000，5000，3500，2000，1000，500
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
1楼 2010-04-22 14:18:39
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另一个天堂

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(MolEPI+1): 不错 2011-09-19 19:25:19
1.建议延长连接时间，我一般过夜（12h）
2.把原载体DNA验证一下，看有没有
3.仔细检查每一步实验
赞一下(3人) 回复此楼
9楼2011-09-19 18:02:49
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pwj

银虫 (小有名气)
我感觉还是连接完了做转化好点！
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2楼2010-04-22 17:30:06
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j2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by pwj at 2010-04-22 17:30:06:
我感觉还是连接完了做转化好点！

就是转化没结果，我不知道什么原因，就直接拿连接液电泳看看，结果就这个样子，很苦恼啊~
赞一下 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
3楼2010-04-22 18:21:14
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lij2
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
4楼2010-04-23 19:50:25
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