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yanger2008

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】梯度PCR有产物,恒温无产物 已有5人参与

扩增一个鸭的基因,PCR仪是bio-rad的mycycler系列,通过升级后可以做梯度(8个温度梯度)PCR。
近期老是出问题,梯度(47~53℃)扩增时共6个温度有较明亮的条带,确定恒温再次扩增,却无任何产物。
请教大家了,着急的很!
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-09-10 17:02:32
再重复一下!是不是操作的问题!另外既然你这个梯度能做出来的话,你可以直接用梯度做也可以啊!把P出来的纯化一下,进行下一步实验就可以了吧!
一个人可以不成功,但不可以不成长!
2楼2010-09-09 16:44:33
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whoisthis

铁虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+1):正解 2010-09-09 17:00:09
也可能是机器不准

条件不要变 重复下
3楼2010-09-09 16:50:14
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Lee_Py

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个 很奇怪啊 你把那较明亮的带 用那个退火温度 多P几次
4楼2010-09-10 16:02:44
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sfxt001

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-09-10 17:02:57
如果你做梯度得到的产物你能确认是你要的东西的话,那就不要恒温做了。至于你扩不出来的原因,我估计你做梯度的时候,因为是摸条件用的是小体系,改为恒温后,你用了大体系,或许跟这个有关系。
5楼2010-09-10 16:15:35
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jasco

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-09-10 17:03:10
47~53℃的8个梯度有6个都能出,所以应该很容易p的啊,楼上的原因有可能。
6楼2010-09-10 16:58:56
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