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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】梯度PCR有产物，恒温无产物
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yanger2008

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】梯度PCR有产物，恒温无产物 已有5人参与

扩增一个鸭的基因，PCR仪是bio-rad的mycycler系列，通过升级后可以做梯度（8个温度梯度）PCR。
近期老是出问题，梯度（47~53℃）扩增时共6个温度有较明亮的条带，确定恒温再次扩增，却无任何产物。
请教大家了，着急的很！
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1楼 2010-09-09 16:36:05
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-09-10 17:02:32
再重复一下！是不是操作的问题！另外既然你这个梯度能做出来的话，你可以直接用梯度做也可以啊！把P出来的纯化一下，进行下一步实验就可以了吧！
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
2楼2010-09-09 16:44:33
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whoisthis

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):正解 2010-09-09 17:00:09
也可能是机器不准

条件不要变 重复下
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3楼2010-09-09 16:50:14
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Lee_Py

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个 很奇怪啊 你把那较明亮的带 用那个退火温度 多P几次
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4楼2010-09-10 16:02:44
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sfxt001

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-09-10 17:02:57
如果你做梯度得到的产物你能确认是你要的东西的话，那就不要恒温做了。至于你扩不出来的原因，我估计你做梯度的时候，因为是摸条件用的是小体系，改为恒温后，你用了大体系，或许跟这个有关系。
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5楼2010-09-10 16:15:35
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jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-09-10 17:03:10
47~53℃的8个梯度有6个都能出，所以应该很容易p的啊，楼上的原因有可能。
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6楼2010-09-10 16:58:56
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