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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因组酶切
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阿娇

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】基因组酶切

我想得到大肠杆菌基因组中的一段基因，用PCR方法扩增没有成功。想通过酶切方法把基因组切成若干片段，然后进行克隆测序。请问直接用单酶切可以得到多个片段吗？ECORI和BamHI用哪个比较好？还是可以进行双酶切？？谢谢各位大虾！
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1楼 2010-08-30 20:22:45
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dingnan8822

铁杆木虫 (正式写手)
阿娇(金币+3):谢谢 2010-08-30 22:13:04
如果单纯的想利用双酶切把基因组切碎，直接查就好了~
一般双酶切都用的是同一个公司的酶，而且保证这两种酶在反应Buffer里的活性最大化，你可要查清楚再开始做~

[ Last edited by dingnan8822 on 2010-8-30 at 22:02 ]
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2楼2010-08-30 22:00:52
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怎么都行

银虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-31 06:08:27
阿娇(金币+5):谢谢！ 2010-08-31 09:13:27
单酶切双酶切都可以，但是所选用的内切酶在你的目的基因内应当没有它的酶切位点，否则就把基因切断了。
再者，你要从基因组酶切产物的众多片段中找到你的目的片段也不容易，最好是依目的基因合成探针，酶切产物电泳后转膜与探针杂交，找到目的带后克隆测序
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3楼2010-08-30 23:06:16
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