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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何高度纯化蛋白，急急急
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darwinxie

铁杆木虫 (职业作家)

自强瓜族族长-----呆瓜大叔

[交流] 【求助/交流】如何高度纯化蛋白，急急急 已有7人参与

我是用strep-tag，纯化蛋白后跑sds-page，总是有很多扎带，如何能高度纯化蛋白呢，就只得到目的条带
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一切都会好的，雨后的天空更加明朗！人生苦短，快乐至上，加油！
1楼 2010-08-11 13:39:26
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):这个方法不错~~ 2010-08-11 18:03:15
可以纯化完之后切胶进行电洗脱。（SDS-PAGE之后，竖着切一小块胶进行考染并脱色，放在切剩下的胶的位置将其他没有进行染色的胶带切下放入透析袋中，并加入适量SDS-PAGE用的电泳液，透析夹夹住透析袋两端，放入水平电泳槽中，加入电泳液，向跑琼脂糖胶一样进行点洗脱，电流100mA,如果大于40KD，需要6个小时的洗脱时间，回收率不低于70%）
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2楼2010-08-11 13:49:29
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2010-08-11 14:38:52:
有标签，亲和层析还有很多杂带就少见了。建议考虑下换标签，例如his-tag。

不建议像2楼说的用SDS-PAGE来做蛋白质回收，用SDS FREE的，不用做复性了，复性不是每个蛋白质都容易做得出来的。如果你的蛋白质表现出 ...

呵呵，忘了问他纯化蛋白的目的是什么了，还是你考虑的比较周全
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13楼2010-08-12 10:29:26
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