| 查看: 2446 | 回复: 12 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
feiye2214木虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】粘性末端连接问题 已有4人参与
|
||
|
小弟在做一个连接，质粒大小4.2kb，目的片段1.6kb 质粒中有EcoR I和BamH I酶切位点，1.6kb的PCR片段两端也被设计了这两个酶切位点 我的流程是：把质粒从菌中提出来，PCR片段是扩增得到；然后用两种限制性酶酶切这两个片段，得到具有粘性末端的4.2kb和1.6kb的片段；一定量跑胶之后，割胶提纯目的片段；提纯液用于连接反应 全程都是采用试剂盒 我想问的是：跑胶之后提纯，是不是会损伤DNA啊？尤其是粘性末端！ 能不能在酶切之后就连接反应，不要经过提纯这一步（跑胶显示条带单一，没有杂带），那里面的限制性酶会不会影响连接啊？ 求高手指点 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有156人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 虚心请教关于平—粘末端的连接问题
已经有18人回复
- 基因克隆中酶切连接问题
已经有13人回复
- 请教一下连接与转化问题！
已经有11人回复
- DNA的连接反应
已经有5人回复
- PCR ， 双酶切，连接问题
已经有17人回复
- 分子克隆连接问题！
已经有12人回复
- 【求助/交流】酶切后的粘性末端补平
已经有4人回复
- 为什么连接这么难呢？
已经有54人回复
- 【求助/交流】T-DNA全长约10000bp能否转入植物基因组。
已经有22人回复
- 【求助/交流】关于酶切产物连接的一点问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】克隆载体的制备 连接问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】请教连接转化方面的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】质粒pPICZA酶切问题
已经有5人回复
10楼2010-08-09 11:09:07
墨香若水
木虫 (著名写手)
小小囧虫
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 3059.1
- 散金: 942
- 红花: 10
- 沙发: 1
- 帖子: 1408
- 在线: 255.2小时
- 虫号: 528502
- 注册: 2008-03-19
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2010-08-08 16:41:28
feiye2214
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1824.9
- 散金: 403
- 红花: 5
- 帖子: 564
- 在线: 209小时
- 虫号: 883642
- 注册: 2009-10-25
- 性别: GG
- 专业: 海洋环境科学
3楼2010-08-08 16:45:20
墨香若水
木虫 (著名写手)
小小囧虫
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 3059.1
- 散金: 942
- 红花: 10
- 沙发: 1
- 帖子: 1408
- 在线: 255.2小时
- 虫号: 528502
- 注册: 2008-03-19
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2010-08-08 16:47:32
