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feiye2214木虫 (正式写手)
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【求助/交流】粘性末端连接问题 已有4人参与
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小弟在做一个连接，质粒大小4.2kb，目的片段1.6kb 质粒中有EcoR I和BamH I酶切位点，1.6kb的PCR片段两端也被设计了这两个酶切位点 我的流程是：把质粒从菌中提出来，PCR片段是扩增得到；然后用两种限制性酶酶切这两个片段，得到具有粘性末端的4.2kb和1.6kb的片段；一定量跑胶之后，割胶提纯目的片段；提纯液用于连接反应 全程都是采用试剂盒 我想问的是：跑胶之后提纯，是不是会损伤DNA啊？尤其是粘性末端！ 能不能在酶切之后就连接反应，不要经过提纯这一步（跑胶显示条带单一，没有杂带），那里面的限制性酶会不会影响连接啊？ 求高手指点 |
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