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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物直接测序，不出峰，啥原因？
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陈思容

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR产物直接测序，不出峰，啥原因？已有7人参与

如题，最近几个序列测序，PFU扩的，跑胶条带挺亮，结果测序公司说不出峰，要么就是杂乱无章，技术人员也说不出来所以然，急死人了
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1楼2010-07-20 13:40:32
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xiaoru2010

★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-20 16:51:50
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2010-07-20 13:40:32:
如题，最近几个序列测序，PFU扩的，跑胶条带挺亮，结果测序公司说不出峰，要么就是杂乱无章，技术人员也说不出来所以然，急死人了

你的产物是用兼并引物扩的吗？是的话就很正常，说明产物里有大小相同或相近的但序列不同的不同基因，方法就是做克隆蓝白斑筛选后挑单菌落去测序，一个板上会测出不同的基因，我的就是这种情况，希望对你有帮助。
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4楼2010-07-20 15:09:56
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liouwzh

木虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-20 16:51:40
实在不行就做TA克隆之后再测序。
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2楼2010-07-20 14:32:15
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andyduan

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2010-07-20 14:44:13
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陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xiaoru2010 at 2010-07-20 15:09:56:

你的产物是用兼并引物扩的吗？是的话就很正常，说明产物里有大小相同或相近的但序列不同的不同基因，方法就是做克隆蓝白斑筛选后挑单菌落去测序，一个板上会测出不同的基因，我的就是这种情况，希望对你有帮助。

不是，特异性引物，平端链接比较麻烦
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5楼2010-07-20 16:04:25
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