| 查看: 5546 | 回复: 11 | |||
[交流]
【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非� 已有10人参与
|
|||
|
您好： 我需要提取革兰氏阳性菌的总DNA(包括染色体DNA和质粒DNA)。我在网上查到细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,请问这种方法提的是总DNA的吗？(包括染色体DNA和质粒DNA) （下面附有这种方法步骤） 细菌基因组DNA包括染色体DNA和质粒DNA吗？还是细菌基因组DNA只指染色体DNA？ 我用这种方法提了DNA，用染色体DNA上的引物进行PCR,灵敏度很高，而用质粒DNA上的引物进行PCR，灵敏度却很低。开始我怀疑是引物的问题，用碱法专门提取了质粒的DNA,用质粒DNA上的引物进行PCR，灵敏度变得很高。说明不是引物的问题，而是细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）的问题，这种方法提的质粒DNA浓度太低。我困惑的是网上有说这种方法是可以提细菌总DNA的(包括染色体DNA和质粒DNA)，但是我做的结果是这种方法提的质粒DNA浓度太低，根本满足不了实验要求。这种方法到底提的是总DNA的吗？还是提的是染色体DNA? 附 ：细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法） 1. 将菌株接种于液体LB培养基，37℃震荡培养过夜。 2. 取1.5ml培养物12000rpm离心2min。 3. 沉淀物加入567 ul的TE缓冲液，反复吹打使之重新悬浮，加入30ul 10%SDS和15ul的蛋白酶K，混匀，于37℃温育1h. 4. 加入100ul 5mol/L NaCl, 充分混匀，再加入80ul CTAB/NaCl溶液，混匀后再65℃温育10min。 5. 加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀，离心4-5min, 将上清转入一只新管中，加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，沉淀可稍加离心。 6. 沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后，离心弃乙醇． 非常期待并感谢感谢您的回答！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有172人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 基因组DNA提取问题
已经有32人回复
- 宏基因组学技术在识别复杂环境样品中微生物的结构组成及功能中的应用
已经有5人回复
- 小鼠肝脏基因组DNA提取大部分降解为300-500bp了
已经有11人回复
- 为什么提取的DNA总是降解？
已经有41人回复
- 【资料】分子生物学常见问题解答
已经有30人回复
- 放线菌基因组DNA提取后，用TE不溶！！？
已经有20人回复
- 【求助/交流】关于提取基因组DNA过程中遇到的难题
已经有10人回复
- 【求助/交流】关于细菌基因组DNA提取的问题？
已经有5人回复
- 【求助/交流】提取细菌基因组DNA的试剂盒
已经有8人回复
- 【求助/交流】提取基因组DNA后琼脂糖凝胶电泳显示拖尾
已经有12人回复
- 【求助/交流】真菌提取基因组DNA的方法
已经有7人回复
- 【求助/交流】提取的植物基因组DNA电泳图，疑问？？？
已经有17人回复
- 【分享】DNA重组实验中的部分技术
已经有159人回复
dorecnu
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 2336.7
- 红花: 10
- 帖子: 785
- 在线: 93.3小时
- 虫号: 448155
- 注册: 2007-11-01
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
|
1.基因组DNA 是指菌体的总DNA，和质粒无关。 2.CTAB/NaCl 法目的主要是为了去除某些样品中的多糖而设计。 3.楼主说了很多，没明白实验设计的目的，请告之。 4.很清楚的是，如果你用提取总DNA的方法，不管是CTAB/NaCl ，还是普通酚氯仿抽提的方法，质粒DNA当然都是会被抽提出来的。但是用提取质粒DNA的方法，基因组DNA基本上会被去除干净。 5.建议楼主：A：想提细菌DNA，用酚氯仿法手工抽提，或使用试剂盒，革兰氏阳性菌务必使用溶菌酶，PK,SDS破细胞壁，10ml菌液因该可以得到很好的抽提效果，记住酚氯仿抽提需抽提至无白色中间层为止，然后加入3M乙酸钠，乙醇沉淀DNA,最后在用乙醇沉淀法纯化，但是如果菌体中有质粒，会残余微量，你用PCR检测因其灵敏度极高，所以会有条带。 B:想提质粒，直接上柱纯化试剂盒，同样建议P1前使用溶菌酶，PK,SDS破壁。 |
9楼2012-03-12 12:22:24
skyqiuqiu119
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2066.6
- 帖子: 207
- 在线: 62.4小时
- 虫号: 1040705
- 注册: 2010-06-12
- 性别: MM
- 专业: 生物材料
2楼2010-07-14 12:12:09
j2
木虫 (正式写手)
- 应助: 56 (初中生)
- 金币: 3797.8
- 散金: 2
- 红花: 4
- 帖子: 688
- 在线: 108.8小时
- 虫号: 452275
- 注册: 2007-11-05
- 性别: MM
- 专业: 卫生检验
3楼2010-07-14 16:48:11
4楼2010-07-14 22:06:21
5楼2010-07-14 22:14:33
scelab
荣誉版主 (文坛精英)
小木虫之有关部门负责人
- 应助: 63 (初中生)
- 贵宾: 1.475
- 金币: 8294.6
- 散金: 4158
- 红花: 39
- 沙发: 99
- 帖子: 21277
- 在线: 3169.3小时
- 虫号: 482065
- 注册: 2007-12-20
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
6楼2010-07-14 23:19:30
7楼2010-07-15 15:11:40
gezilin1862
金虫 (小有名气)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 1435.2
- 散金: 45
- 红花: 2
- 帖子: 244
- 在线: 64.4小时
- 虫号: 1508794
- 注册: 2011-11-25
- 性别: MM
- 专业: 食品科学基础
8楼2012-03-12 09:26:08
10楼2012-03-29 19:25:17
