应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非�
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 5142  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hgt832

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非� 已有10人参与

您好：

我需要提取革兰氏阳性菌的总DNA(包括染色体DNA和质粒DNA)。我在网上查到细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,请问这种方法提的是总DNA的吗？(包括染色体DNA和质粒DNA) （下面附有这种方法步骤）

细菌基因组DNA包括染色体DNA和质粒DNA吗？还是细菌基因组DNA只指染色体DNA？

我用这种方法提了DNA，用染色体DNA上的引物进行PCR,灵敏度很高，而用质粒DNA上的引物进行PCR，灵敏度却很低。开始我怀疑是引物的问题，用碱法专门提取了质粒的DNA,用质粒DNA上的引物进行PCR，灵敏度变得很高。说明不是引物的问题，而是细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）的问题，这种方法提的质粒DNA浓度太低。我困惑的是网上有说这种方法是可以提细菌总DNA的(包括染色体DNA和质粒DNA)，但是我做的结果是这种方法提的质粒DNA浓度太低，根本满足不了实验要求。这种方法到底提的是总DNA的吗？还是提的是染色体DNA?

附 ：细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）

1. 将菌株接种于液体LB培养基，37℃震荡培养过夜。
2. 取1.5ml培养物12000rpm离心2min。
3. 沉淀物加入567 ul的TE缓冲液，反复吹打使之重新悬浮，加入30ul 10%SDS和15ul的蛋白酶K，混匀，于37℃温育1h.
4. 加入100ul 5mol/L NaCl, 充分混匀，再加入80ul CTAB/NaCl溶液，混匀后再65℃温育10min。
5. 加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀，离心4-5min, 将上清转入一只新管中，加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，沉淀可稍加离心。
6. 沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后，离心弃乙醇．

非常期待并感谢感谢您的回答！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-14 12:05:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
提质粒可以提出总DNA来的。。。
如果是扩pcr,够用了啊
赞一下(1人) 回复此楼
小木虫之有关部门负责人
6楼2010-07-14 23:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

skyqiuqiu119

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我感觉不是总DNA，有待考证。
赞一下(1人) 回复此楼
哎哟~可爱QQ~不错哦~~
2楼2010-07-14 12:12:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):正解~~~ 2010-07-14 23:18:15
革兰氏阳性菌该用溶菌酶作用1小时再按常规方法提吧
赞一下(2人) 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
3楼2010-07-14 16:48:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hgt832

铜虫 (初入文坛)
是的，我在第一步加了溶菌酶了。我目的是提总DNA（包括染色体DNA和质粒DNA），请问这种方法是提总DNA的吗？为什么这种方法提取的质粒DNA浓度很低。有什么好的提总DNA的方法（提的质粒DNA浓度高些）吗？非常感谢！
赞一下 回复此楼
4楼2010-07-14 22:06:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 275求调剂 +3 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:22 by guoweigw
[考研] 一志愿武汉理工，总分321，英一数二，求老师收留。 +5 nnnnnnn5 2026-03-25 5/250 2026-03-27 04:42 by wxiongid
[考研] 286求调剂 +3 lim0922 2026-03-26 3/150 2026-03-26 23:07 by 不吃魚的貓
[考研] 07化学280分求调剂 +8 722865 2026-03-23 8/400 2026-03-26 20:00 by 不吃魚的貓
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +9 holy J 2026-03-21 9/450 2026-03-26 15:47 by 161765490
[考研] 寻找调剂 +5 倔强芒? 2026-03-21 8/400 2026-03-26 13:25 by 0906ljy
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。，。，。，。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +7 niko- 2026-03-22 7/350 2026-03-25 20:14 by qingfeng258
[考研] 机械学硕总分317求调剂！！！！ +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 食品专硕 一志愿双一流 328 +3 xiaom99 2026-03-21 4/200 2026-03-24 21:20 by lailaisimei
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 考研调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭