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your2007

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】pNPG测酶活 已有15人参与

我用pNPG测酶活,我的酶促反应液在反应过程中没有颜色变化,加了碳酸钠马上变成黄色溶液,不知道怎么回事啊,应该是在没有加入碳酸钠之前就应该有水解产物对硝基苯酚生成啊,期望知道的说说谢谢了
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your2007

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by zemin_fang at 2010-07-06 16:09:45:
你的反应体系的pH是不是<7??
对硝基酚在碱性条件下才会形成可见的黄色,加入1M碳酸钠的目的就是将反应体系中的pH调整到碱性,让其显色,同时又可以终止酶反应。

嗯,我的反应条是酸性(pH4.5)下进行的,我加入2ml,0.5M的碳酸钠。不过,我用pH6.0的缓冲液也试过,这个在碳酸钠加入之前就能够看到溶液逐渐变黄色。这是为什么呢。谢谢!
爱人者被爱,敬人者人敬
3楼2010-07-06 17:37:43
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zemin_fang

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1):谢谢交流 2010-07-06 17:38:09
your2007(金币+6):很是谢谢你啊。 2010-07-06 17:40:02
你的反应体系的pH是不是<7??
对硝基酚在碱性条件下才会形成可见的黄色,加入1M碳酸钠的目的就是将反应体系中的pH调整到碱性,让其显色,同时又可以终止酶反应。
2楼2010-07-06 16:09:45
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主


your2007(金币+1):谢谢参与
路过,学习学习,
4楼2010-07-06 17:47:58
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zemin_fang

木虫 (正式写手)


lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~ 2010-07-06 20:21:36
引用回帖:
Originally posted by your2007 at 2010-07-06 17:37:43:

嗯,我的反应条是酸性(pH4.5)下进行的,我加入2ml,0.5M的碳酸钠。不过,我用pH6.0的缓冲液也试过,这个在碳酸钠加入之前就能够看到溶液逐渐变黄色。这是为什么呢。谢谢!

并不是非要求pH>7才会显色的,没有那么苛刻。但是你加入碳酸钠以后pH都会在11左右,这样可以保证不同pH条件下最终pH一致
5楼2010-07-06 19:39:40
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