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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 其它 » pnpg 法测定α葡萄糖苷酶的活性实验
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夏之动

银虫 (初入文坛)

[求助] pnpg 法测定α葡萄糖苷酶的活性实验 已有4人参与

我现在用pnpg法测α葡萄糖苷酶的酶活，是先用0.1M的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液溶解酶，然后取缓冲液1.6mL，酶液0.1mL，谷胱甘肽0.1mL，在49℃下水浴10min，再加入pnpg 10mM的0.2mL，49℃下水浴反应1h，再加1M碳酸钠2mL终止反应，可是测出来的吸光度只有0.1多点，我已经做了很多次了，都做不出好的结果，不知道问题出在了哪里，想问下有谁做过这方面的，指导下，谢谢！
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1楼 2014-04-01 18:26:36
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xk123xk

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
PSA: 金币+2, 3u 2014-04-02 08:53:10
你的酶来源是什么，是酵母菌吗？我是用酵母菌来源的糖苷酶做的，做的时候配制出10u/ml的酶液，总反应体系是2ml的。我觉得你可以加大酶浓度或者将总反应体系变小。
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夏之动
2楼2014-04-01 20:36:04
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夏之动

银虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by xk123xk at 2014-04-01 20:36:04
你的酶来源是什么，是酵母菌吗？我是用酵母菌来源的糖苷酶做的，做的时候配制出10u/ml的酶液，总反应体系是2ml的。我觉得你可以加大酶浓度或者将总反应体系变小。

我的酶来源是黑曲霉，这个有关系吗？酶浓度我后来有直接用厂家寄的液体酶做，是45000U/mL的，可还是没有明显显色
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3楼2014-04-01 21:38:41
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夏之动

银虫 (初入文坛)
★
PSA: 金币+1, 3u 2014-04-02 08:53:24
引用回帖:
2楼: Originally posted by xk123xk at 2014-04-01 20:36:04
你的酶来源是什么，是酵母菌吗？我是用酵母菌来源的糖苷酶做的，做的时候配制出10u/ml的酶液，总反应体系是2ml的。我觉得你可以加大酶浓度或者将总反应体系变小。

减小总反应体系的话，分光光度计测不了呀？！
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4楼2014-04-01 21:40:55
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xk123xk

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏之动 at 2014-04-01 21:38:41
我的酶来源是黑曲霉，这个有关系吗？酶浓度我后来有直接用厂家寄的液体酶做，是45000U/mL的，可还是没有明显显色...

那你能不能把加入酶液的体积加大试一试，其实想提高吸光度无非就是加大酶用量，和增加反应时间。

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5楼2014-04-02 15:48:57
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个酶为什么不在生理体温37℃做反应呢？
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6楼2014-04-02 17:18:37
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夏之动

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xk123xk at 2014-04-02 15:48:57
那你能不能把加入酶液的体积加大试一试，其实想提高吸光度无非就是加大酶用量，和增加反应时间。
...

可以说一下你具体的方法吗？

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7楼2014-04-02 18:12:45
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懒虫红岩

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主，您的底物PNPG全名是什么，PNPG有好几种，结构有α和β的，如果底物是β型的那就是底物错了
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8楼2015-10-28 10:18:01
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娜娜小美女

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by xk123xk at 2014-04-01 20:36:04
你的酶来源是什么，是酵母菌吗？我是用酵母菌来源的糖苷酶做的，做的时候配制出10u/ml的酶液，总反应体系是2ml的。我觉得你可以加大酶浓度或者将总反应体系变小。

我想问一下，底物浓度大小会影响结果吗？

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9楼2017-03-19 21:42:45
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