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夏之动

银虫 (初入文坛)

[求助] pnpg 法测定α葡萄糖苷酶的活性实验 已有4人参与

我现在用pnpg法测α葡萄糖苷酶的酶活,是先用0.1M的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液溶解酶,然后取缓冲液1.6mL,酶液0.1mL,谷胱甘肽0.1mL,在49℃下水浴10min,再加入pnpg 10mM的0.2mL,49℃下水浴反应1h,再加1M碳酸钠2mL终止反应,可是测出来的吸光度只有0.1多点,我已经做了很多次了,都做不出好的结果,不知道问题出在了哪里,想问下有谁做过这方面的,指导下,谢谢!
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夏之动

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xk123xk at 2014-04-02 15:48:57
那你能不能把加入酶液的体积加大试一试,其实想提高吸光度无非就是加大酶用量,和增加反应时间。
...

可以说一下你具体的方法吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-04-02 18:12:45
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xk123xk

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
PSA: 金币+2, 3u 2014-04-02 08:53:10
你的酶来源是什么,是酵母菌吗?我是用酵母菌来源的糖苷酶做的,做的时候配制出10u/ml的酶液,总反应体系是2ml的。我觉得你可以加大酶浓度或者将总反应体系变小。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2014-04-01 20:36:04
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夏之动

银虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by xk123xk at 2014-04-01 20:36:04
你的酶来源是什么,是酵母菌吗?我是用酵母菌来源的糖苷酶做的,做的时候配制出10u/ml的酶液,总反应体系是2ml的。我觉得你可以加大酶浓度或者将总反应体系变小。

我的酶来源是黑曲霉,这个有关系吗?酶浓度我后来有直接用厂家寄的液体酶做,是45000U/mL的,可还是没有明显显色
3楼2014-04-01 21:38:41
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夏之动

银虫 (初入文坛)


PSA: 金币+1, 3u 2014-04-02 08:53:24
引用回帖:
2楼: Originally posted by xk123xk at 2014-04-01 20:36:04
你的酶来源是什么,是酵母菌吗?我是用酵母菌来源的糖苷酶做的,做的时候配制出10u/ml的酶液,总反应体系是2ml的。我觉得你可以加大酶浓度或者将总反应体系变小。

减小总反应体系的话,分光光度计测不了呀?!
4楼2014-04-01 21:40:55
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