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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切电泳问题
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick

[交流] 【求助/交流】酶切电泳问题 已有11人参与

昨天今天连做了两次双酶切，都很失败，不知道是什么原因，请高手帮帮忙啊~
两个问题：
1、以前提质粒的时候，都是单一条带，很清楚，最近提的都是这个样子（如下图）。都是一样的操作方法，不知道何故，请大家帮我分析一下。

2、下面这个是酶切图，小的Marker是100bp的，大的是1KB，酶切时间6.5 h，以前切这个时间效果很好，但是现在感觉条带非常模糊，连marker也不好，不知道是什么原因，胶的配制什么的都是和以前一样的。请大家帮我分析一下，谢谢啦。
分别是以前的双酶图和现在的双酶图（只是更换了双酶切体系中的一种酶，另一种相同，别的都一样）


请大家帮帮忙啦，非常感谢

[ Last edited by bettyshan on 2010-6-27 at 17:40 ]
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我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！
1楼 2010-06-27 17:39:34
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick
没人给我分析下吗……
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我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！
2楼2010-06-28 08:50:18
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xiaoru2010

提的质粒应该是一条带吗？
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3楼2010-06-28 10:07:01
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yinsongna

金虫 (正式写手)
提出的质粒有三，四条带也是正常的，每一批的盒子都不一样，
你的双酶切切出的两条带都是多大的？你的第二个图切的是相同的东西吗 像是切散了  要不你把图再标的清楚一些？
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4楼2010-06-28 10:23:17
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liyong1981

金虫 (正式写手)

！

★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-28 15:46:21
谁说你上次提的是一条带，这次就非得还是啊，一般都不是好吧~质粒形态太多，
你酶切的图第二次看的不清楚，~Marker也跑成那样子，我给你2个原因：1。缓冲液换换，胶重新做，2。酶切时候，水换换，还有你怎么切这么久，多大体系？一般的来说3小时足矣！！！！！！1

[ Last edited by dhd997 on 2010-6-28 at 15:46 ]
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5楼2010-06-28 10:47:00
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yx_sun70

金虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-28 15:46:48
1图中应考虑是否有杂菌
2图中考虑换掉的酶与你现在用的缓冲系统是否配套
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6楼2010-06-28 10:48:05
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j2

木虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-28 15:46:56
质粒那个marker 也是最大1kb么？质粒的过大片段可能是你在提的过程中把基因组DNA打断了造成的~还有就是楼上说的，是不是有杂菌

酶切如果是marker 都不行的话，还是先从电泳上找原因吧。换换缓冲液，调一下电压什么的。
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
7楼2010-06-28 13:33:48
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xlshanxlshan

木虫 (著名写手)
进来学习
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8楼2010-06-28 15:41:16
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风荻

金虫 (小有名气)
现在天热，你的胶要多凝固会。
还有就是你的缓冲液的问题，要换新的
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9楼2010-06-28 17:05:43
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catherine_

木虫 (正式写手)
你的marker都跑成这样，就啥都不用说了。先把缓冲液重新换新的，然后eb重新配吧。
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10楼2010-06-28 17:06:53
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