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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick

[交流] 【求助/交流】酶切电泳问题已有11人参与

昨天今天连做了两次双酶切,都很失败,不知道是什么原因,请高手帮帮忙啊~
两个问题:
1、以前提质粒的时候,都是单一条带,很清楚,最近提的都是这个样子(如下图)。都是一样的操作方法,不知道何故,请大家帮我分析一下。

2、下面这个是酶切图,小的Marker是100bp的,大的是1KB,酶切时间6.5 h,以前切这个时间效果很好,但是现在感觉条带非常模糊,连marker也不好,不知道是什么原因,胶的配制什么的都是和以前一样的。请大家帮我分析一下,谢谢啦。
分别是以前的双酶图和现在的双酶图(只是更换了双酶切体系中的一种酶,另一种相同,别的都一样)


请大家帮帮忙啦,非常感谢

[ Last edited by bettyshan on 2010-6-27 at 17:40 ]
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我们都是芸芸众生的小人物,相遇相知,都是幸福!
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick

没人给我分析下吗……
我们都是芸芸众生的小人物,相遇相知,都是幸福!
2楼2010-06-28 08:50:18
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xiaoru2010

提的质粒应该是一条带吗?
3楼2010-06-28 10:07:01
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yinsongna

金虫 (正式写手)

提出的质粒有三,四条带也是正常的,每一批的盒子都不一样,
你的双酶切切出的两条带都是多大的?你的第二个图切的是相同的东西吗 像是切散了  要不你把图再标的清楚一些?
4楼2010-06-28 10:23:17
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liyong1981

金虫 (正式写手)



dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-28 15:46:21
谁说你上次提的是一条带,这次就非得还是啊,一般都不是好吧~质粒形态太多,
你酶切的图第二次看的不清楚,~Marker也跑成那样子,我给你2个原因:1。缓冲液换换,胶重新做,2。酶切时候,水换换,还有你怎么切这么久,多大体系?一般的来说3小时足矣!!!!!!1

[ Last edited by dhd997 on 2010-6-28 at 15:46 ]
5楼2010-06-28 10:47:00
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yx_sun70

金虫 (正式写手)


dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-28 15:46:48
1图中应考虑是否有杂菌
2图中考虑换掉的酶与你现在用的缓冲系统是否配套
6楼2010-06-28 10:48:05
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j2

木虫 (正式写手)


dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-28 15:46:56
质粒那个marker 也是最大1kb么?质粒的过大片段可能是你在提的过程中把基因组DNA打断了造成的~还有就是楼上说的,是不是有杂菌

酶切如果是marker 都不行的话,还是先从电泳上找原因吧。换换缓冲液,调一下电压什么的。
修炼ing,当虫仙……
7楼2010-06-28 13:33:48
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xlshanxlshan

木虫 (著名写手)

进来学习
8楼2010-06-28 15:41:16
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风荻

金虫 (小有名气)

现在天热,你的胶要多凝固会。
还有就是你的缓冲液的问题,要换新的
9楼2010-06-28 17:05:43
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catherine_

木虫 (正式写手)

你的marker都跑成这样,就啥都不用说了。先把缓冲液重新换新的,然后eb重新配吧。
10楼2010-06-28 17:06:53
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