24小时热门版块排行榜    

查看: 1975  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhshch2009

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助蛋白纯化问题 已有9人参与

请问高手:我的蛋白样品上样之后,会立刻显示出一个峰,之后用咪唑洗脱,咪唑浓度最终洗到500mM,也一直没有洗脱峰出现,UV监测基本都是平缓的。请问是什么原因,我已做过western ,证明我所表达的蛋白已经带了his-tag,但是用镍柱就是纯不出来~很想知道为什么。
谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泡泡9706

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-06-13 20:55:05
引用回帖:
Originally posted by zhshch2009 at 2010-06-13 10:55:57:

我摇了一升的菌液,提的包涵体,变性复性之后上的柱,跑SDSPAGE看目的条带非常浓,那请问表达量要达到什么值才可以挂柱呀?

这倒不是问题,是表达量很少的话由于镍离子渗漏会纯不到蛋白。
你说的变性复性,就是说你的蛋白已经有活性了吗?即使这样,his标签也很可能被折叠到蛋白内部,挂不上柱。
5楼2010-06-13 11:12:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

泡泡9706

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的蛋白表达量高吗?
2楼2010-06-13 10:53:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhshch2009

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 泡泡9706 at 2010-06-13 10:53:23:
你的蛋白表达量高吗?

我摇了一升的菌液,提的包涵体,变性复性之后上的柱,跑SDSPAGE看目的条带非常浓,那请问表达量要达到什么值才可以挂柱呀?
3楼2010-06-13 10:55:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fluleaf

捐助贵宾 (小有名气)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-13 20:54:42
你的样品溶液没用平衡缓冲液透析,导致上样完就有峰出现;蛋白没挂上去可能需要优化上样条件,或者树脂有问题。
4楼2010-06-13 11:01:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +4 niko- 2026-03-22 4/200 2026-03-23 07:56 by Iveryant
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 318求调剂 +4 plum李子 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:17 by ColorlessPI
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 一志愿华中科技大学071000,求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 286求调剂 +10 Faune 2026-03-21 10/500 2026-03-21 23:34 by 314126402
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 一志愿深大,0703化学,总分302,求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666!
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
信息提示
请填处理意见