版块导航: 正在加载中...

客户端APP下载

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhshch2009

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 34.7
散金: 3
帖子: 100
在线: 10.3小时
虫号: 831111
注册: 2009-08-20
性别: MM
专业: 微生物生理与生物化学

[交流] 【求助/交流】求助蛋白纯化问题已有9人参与

请问高手：我的蛋白样品上样之后，会立刻显示出一个峰，之后用咪唑洗脱，咪唑浓度最终洗到500mM，也一直没有洗脱峰出现，UV监测基本都是平缓的。请问是什么原因，我已做过western ,证明我所表达的蛋白已经带了his-tag,但是用镍柱就是纯不出来～很想知道为什么。
谢谢！

» 猜你喜欢

含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松已经有0人回复
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有94人回复
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析已经有0人回复
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析已经有0人回复
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析已经有0人回复
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析已经有0人回复
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析已经有0人回复
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点已经有0人回复
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

进行羟胺裂解后，进行蛋白的二次过亲和层析住纯化问题！！！！求助啊！！！已经有9人回复
GST融合蛋白纯化求助！！！已经有19人回复
【求助/交流】求教蛋白酶的分离纯化中遇到的问题已经有5人回复
【求助/交流】蛋白质纯化的疑难问题已经有11人回复
【求助/交流】求解蛋白质分离纯化的难题已经有22人回复
【求助/交流】蛋白质的阴离子交换纯化已经有13人回复
【求助/交流】请教蛋白质纯化实验遇到的麻烦！！！急急已经有3人回复
【求助/交流】蛋白纯化中透析的问题！！已经有9人回复
【求助/交流】请教一个his-tag蛋白质纯化问题已经有9人回复
【求助/交流】关于分子筛纯化蛋白的问题已经有5人回复
【求助/交流】离子交换纯化原核表达蛋白已经有15人回复
【求助/交流】蛋白纯化后透析及浓缩问题已经有8人回复
【求助/交流】原核表达蛋白纯化已经有29人回复
【求助/交流】有关蛋白纯化及其基因克隆的问题！请大家帮助！已经有10人回复
【求助/交流】蛋白纯化问题，怎样分离约35kD和26kD的条带已经有10人回复

1楼 2010-06-13 10:42:13

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

fluleaf

捐助贵宾 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 142.2
散金: 810
红花: 21
帖子: 255
在线: 106.4小时
虫号: 235440
注册: 2006-04-01
性别: GG
专业: 肿瘤生物治疗

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-13 20:54:42

你的样品溶液没用平衡缓冲液透析，导致上样完就有峰出现；蛋白没挂上去可能需要优化上样条件，或者树脂有问题。

赞一下(2人)

4楼2010-06-13 11:01:11

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 18 个回答

泡泡9706

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 531.1
帖子: 130
在线: 21.7小时
虫号: 601036
注册: 2008-09-12
性别: MM
专业: 微生物遗传育种学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

你的蛋白表达量高吗？

赞一下(1人)

2楼2010-06-13 10:53:23

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zhshch2009

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 34.7
散金: 3
帖子: 100
在线: 10.3小时
虫号: 831111
注册: 2009-08-20
性别: MM
专业: 微生物生理与生物化学

引用回帖:

Originally posted by 泡泡9706 at 2010-06-13 10:53:23:
你的蛋白表达量高吗？

我摇了一升的菌液，提的包涵体，变性复性之后上的柱，跑SDSPAGE看目的条带非常浓，那请问表达量要达到什么值才可以挂柱呀？

3楼2010-06-13 10:55:57

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

泡泡9706

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 531.1
帖子: 130
在线: 21.7小时
虫号: 601036
注册: 2008-09-12
性别: MM
专业: 微生物遗传育种学

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-06-13 20:55:05

引用回帖:

Originally posted by zhshch2009 at 2010-06-13 10:55:57:

我摇了一升的菌液，提的包涵体，变性复性之后上的柱，跑SDSPAGE看目的条带非常浓，那请问表达量要达到什么值才可以挂柱呀？

这倒不是问题，是表达量很少的话由于镍离子渗漏会纯不到蛋白。
你说的变性复性，就是说你的蛋白已经有活性了吗？即使这样，his标签也很可能被折叠到蛋白内部，挂不上柱。

赞一下(2人)

5楼2010-06-13 11:12:39

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 18 个回答

最具人气热帖推荐 [查看全部]		作者	回/看	最后发表

	[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +19	Lanmanbaby 2026-08-09	32/1600	2026-08-12 09:56 by gltch
	[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +5	Tide man 2026-08-11	5/250	2026-08-12 09:24 by kangban
	[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7	布布和一二 2026-08-10	10/500	2026-08-12 09:12 by 布布和一二
	[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3	yuleib84 2026-08-11	3/150	2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
	[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +8	Tide man 2026-08-10	9/450	2026-08-11 20:39 by beefly
	[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真（我的申报经验） +3	majunge000 2026-08-11	4/200	2026-08-11 20:13 by lch2012
	[基金申请] 帮忙看看fileCode +7	wwncly 2026-08-10	13/650	2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
	[硕博家园] 读博的好处 +3	lnee 2026-08-11	3/150	2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
	[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3	布布和一二 2026-08-11	4/200	2026-08-11 15:20 by aasahr
	[基金申请] 听说今天filecode变了 +26	布布和一二 2026-08-06	49/2450	2026-08-11 13:18 by WH3796
	[基金申请] FileCode能看出啥？ +7	要乐观耀哥 2026-08-10	17/850	2026-08-11 10:50 by 要乐观耀哥
	[基金申请] filecode +9	documentary 2026-08-10	9/450	2026-08-11 10:08 by wk7465
	[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17	且听虎啸 2026-08-07	24/1200	2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
	[基金申请] 好奇怪的filecode +4	布布和一二 2026-08-08	5/250	2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
	[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7	瞬息宇宙 2026-08-10	8/400	2026-08-10 12:42 by Vivilian
	[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9	布布和一二 2026-08-08	9/450	2026-08-10 11:22 by xxxx2020
	[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5	yang182083 2026-08-06	7/350	2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
	[基金申请] 关于filecode +4	布布和一二 2026-08-07	7/350	2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
	[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3	Tide man 2026-08-07	4/200	2026-08-07 22:39 by Tide man
	[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8	Tide man 2026-08-05	10/500	2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu