24小时热门版块排行榜    

查看: 2240  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhshch2009

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助蛋白纯化问题 已有9人参与

请问高手:我的蛋白样品上样之后,会立刻显示出一个峰,之后用咪唑洗脱,咪唑浓度最终洗到500mM,也一直没有洗脱峰出现,UV监测基本都是平缓的。请问是什么原因,我已做过western ,证明我所表达的蛋白已经带了his-tag,但是用镍柱就是纯不出来~很想知道为什么。
谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fluleaf

捐助贵宾 (小有名气)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-13 20:54:42
你的样品溶液没用平衡缓冲液透析,导致上样完就有峰出现;蛋白没挂上去可能需要优化上样条件,或者树脂有问题。
4楼2010-06-13 11:01:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

泡泡9706

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的蛋白表达量高吗?
2楼2010-06-13 10:53:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhshch2009

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 泡泡9706 at 2010-06-13 10:53:23:
你的蛋白表达量高吗?

我摇了一升的菌液,提的包涵体,变性复性之后上的柱,跑SDSPAGE看目的条带非常浓,那请问表达量要达到什么值才可以挂柱呀?
3楼2010-06-13 10:55:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泡泡9706

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-06-13 20:55:05
引用回帖:
Originally posted by zhshch2009 at 2010-06-13 10:55:57:

我摇了一升的菌液,提的包涵体,变性复性之后上的柱,跑SDSPAGE看目的条带非常浓,那请问表达量要达到什么值才可以挂柱呀?

这倒不是问题,是表达量很少的话由于镍离子渗漏会纯不到蛋白。
你说的变性复性,就是说你的蛋白已经有活性了吗?即使这样,his标签也很可能被折叠到蛋白内部,挂不上柱。
5楼2010-06-13 11:12:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 8/400 2026-09-01 12:58 by ssyjh
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
信息提示
请填处理意见