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yanhong2029
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[交流]
【求助/交流】枯草中表达外源基因,有蛋白,但是没有酶活,是什么原因? 已有3人参与
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来源于大肠杆菌一种变形菌(革兰氏阳性细菌)的外源目的基因,将其克隆至大肠杆菌中表达,能够表达出活性。 然后将其克隆至枯草芽孢杆菌中表达,采用的是枯草编码30S核糖蛋白rpsD基因的启动子,该启动子是一组成型强启动子。该表达出来的蛋白酶,在作用于底物时需要还原型辅酶I:NADH。 SDS-PAGE显示有蛋白,但是测定酶活性时一直没有结果? 十分苦恼,未知是什么原因? 是形成包涵体呢? 还是该蛋白在该宿主中虽然表达,但是表达出来的就是没有活性的蛋白? 还是辅酶的原因? 需要如何确定? 还请各位朋友能够帮忙解决! 着急毕业呢! 先谢谢各位了! |
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yanhong2029
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