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yanhong2029
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[交流]
【求助/交流】枯草中表达外源基因，有蛋白，但是没有酶活，是什么原因？ 已有3人参与
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来源于大肠杆菌一种变形菌（革兰氏阳性细菌）的外源目的基因，将其克隆至大肠杆菌中表达，能够表达出活性。 然后将其克隆至枯草芽孢杆菌中表达，采用的是枯草编码30S核糖蛋白rpsD基因的启动子，该启动子是一组成型强启动子。该表达出来的蛋白酶，在作用于底物时需要还原型辅酶I：NADH。 SDS-PAGE显示有蛋白，但是测定酶活性时一直没有结果？ 十分苦恼，未知是什么原因？ 是形成包涵体呢？ 还是该蛋白在该宿主中虽然表达，但是表达出来的就是没有活性的蛋白？ 还是辅酶的原因？ 需要如何确定？ 还请各位朋友能够帮忙解决！ 着急毕业呢！ 先谢谢各位了！ |
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