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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS蛋白电泳求助
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安氏

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】SDS蛋白电泳求助 已有6人参与

最近做SDS蛋白电泳，菌液超声破碎时用的缓冲的PH6.6的磷酸钾缓冲，破碎后取上清，加入SDS蛋白电泳的buffer，95度煮五分钟后，酶液总是呈近似固体状，无法点样，如果破碎时缓冲是PH8.0的话，就不会凝固，是不是酸性的缓冲会与电泳的buffer起什么反应啊？电泳buffer的成分是SDS，β-巯基乙醇，甘油，溴酚兰和PH6.8的Tris-HC
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1楼 2010-06-01 08:49:41
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-07-05 15:01:08
引用回帖:
Originally posted by 安氏 at 2010-06-01 08:49:41:
最近做SDS蛋白电泳，菌液超声破碎时用的缓冲的PH6.6的磷酸钾缓冲，破碎后取上清，加入SDS蛋白电泳的buffer，95度煮五分钟后，酶液总是呈近似固体状，无法点样，如果破碎时缓冲是PH8.0的话，就不会凝固，是不是酸性 ...

关键是：SDS遇过多的 K+ 会产生絮状沉淀！

建议你的破菌缓冲液改用 Tris-HCl 。
另，如果单纯地看全菌体 电泳图谱，根本不用破碎，拿发酵液和电泳buffer 一起煮5min 即可。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2010-06-01 09:10:27
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议用Tris或者HEPES缓冲系统
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-06-01 09:58:17
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安氏

金虫 (正式写手)
非常感谢
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4楼2010-06-01 10:18:10
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zhengjiess

木虫 (著名写手)
SDS遇到K+会变成絮状沉淀？
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选择了就不要后悔
5楼2010-07-05 14:57:02
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天外飞仙→顺

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-05 16:52:43
给你个好的办法，，不用超声，，直接煮沸菌体(10min)后离心取上清，保你成功！！我都是这么做的！！！祝你顺利
赞一下(2人) 回复此楼
我无法改变自己的出生，但我可以决定自己的命运：命中注定我是一个王者，我必须拿出王者的风范！！！
6楼2010-07-05 15:36:56
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秀才ecust

新虫 (初入文坛)
直接煮沸菌体离心后取上清，全细胞的就不好做了
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7楼2010-12-24 16:50:20
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