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安氏

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】SDS蛋白电泳求助 已有6人参与

最近做SDS蛋白电泳,菌液超声破碎时用的缓冲的PH6.6的磷酸钾缓冲,破碎后取上清,加入SDS蛋白电泳的buffer,95度煮五分钟后,酶液总是呈近似固体状,无法点样,如果破碎时缓冲是PH8.0的话,就不会凝固,是不是酸性的缓冲会与电泳的buffer起什么反应啊?电泳buffer的成分是SDS,β-巯基乙醇,甘油,溴酚兰和PH6.8的Tris-HC
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-07-05 15:01:08
引用回帖:
Originally posted by 安氏 at 2010-06-01 08:49:41:
最近做SDS蛋白电泳,菌液超声破碎时用的缓冲的PH6.6的磷酸钾缓冲,破碎后取上清,加入SDS蛋白电泳的buffer,95度煮五分钟后,酶液总是呈近似固体状,无法点样,如果破碎时缓冲是PH8.0的话,就不会凝固,是不是酸性 ...

关键是:SDS遇过多的 K+ 会产生絮状沉淀!

建议你的破菌缓冲液改用 Tris-HCl 。
另,如果单纯地看全菌体 电泳图谱,根本不用破碎,拿发酵液和电泳buffer 一起煮5min 即可。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2010-06-01 09:10:27
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ben1147

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
建议用Tris或者HEPES缓冲系统
3楼2010-06-01 09:58:17
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安氏

金虫 (正式写手)

非常感谢
4楼2010-06-01 10:18:10
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zhengjiess

木虫 (著名写手)

SDS遇到K+会变成絮状沉淀?
选择了就不要后悔
5楼2010-07-05 14:57:02
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天外飞仙→顺

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-05 16:52:43
给你个好的办法,,不用超声,,直接煮沸菌体(10min)后离心取上清,保你成功!!我都是这么做的!!!祝你顺利
我无法改变自己的出生,但我可以决定自己的命运:命中注定我是一个王者,我必须拿出王者的风范!!!
6楼2010-07-05 15:36:56
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秀才ecust

新虫 (初入文坛)

直接煮沸菌体离心后取上清,全细胞的就不好做了
7楼2010-12-24 16:50:20
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