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安氏

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】SDS蛋白电泳求助已有6人参与

最近做SDS蛋白电泳，菌液超声破碎时用的缓冲的PH6.6的磷酸钾缓冲，破碎后取上清，加入SDS蛋白电泳的buffer，95度煮五分钟后，酶液总是呈近似固体状，无法点样，如果破碎时缓冲是PH8.0的话，就不会凝固，是不是酸性的缓冲会与电泳的buffer起什么反应啊？电泳buffer的成分是SDS，β-巯基乙醇，甘油，溴酚兰和PH6.8的Tris-HC

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1楼 2010-06-01 08:49:41

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ben1147

木虫 (正式写手)

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建议用Tris或者HEPES缓冲系统

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3楼2010-06-01 09:58:17

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HarveyWang

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lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-07-05 15:01:08

引用回帖:

Originally posted by 安氏 at 2010-06-01 08:49:41:
最近做SDS蛋白电泳，菌液超声破碎时用的缓冲的PH6.6的磷酸钾缓冲，破碎后取上清，加入SDS蛋白电泳的buffer，95度煮五分钟后，酶液总是呈近似固体状，无法点样，如果破碎时缓冲是PH8.0的话，就不会凝固，是不是酸性 ...

关键是：SDS遇过多的 K+ 会产生絮状沉淀！

建议你的破菌缓冲液改用 Tris-HCl 。
另，如果单纯地看全菌体电泳图谱，根本不用破碎，拿发酵液和电泳buffer 一起煮5min 即可。

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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】