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Kirsten_hkm

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于PCR的问题 已有10人参与

这是我在小木虫上的处女贴。。。
诚心请教一下大家，最近跑PCR结果让我很挫败！两星期前很稳定的条件突然什么都跑不出了，连引物二聚体也没有，请问一下大家可能是什么原因？
还有，有时候取PCR结果时发现液体都在管壁上，离心了才会下来，会是什么原因？会对结果又影响吗？
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1楼 2010-05-23 15:09:02
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lyg7720349

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):有可能 2010-05-23 16:21:48
对于不出结果的问题，估计是你的酶有问题或者操作失误
   对于第二问题：你可能加好混合物P之前没有离心吧。
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望大家都各有所获！
2楼2010-05-23 15:17:14
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pan琳lin

木虫 (职业作家)

小木虫水军秘书长

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):很热心 2010-05-23 16:22:03
内容已删除
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cptbtptp,bcptdtptp (吃葡萄不吐葡萄皮，不吃葡萄倒吐葡萄皮）
3楼2010-05-23 15:36:14
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cqyniu

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是换了什么组分呢？你做PCR的时候是不是没有热盖啊
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4楼2010-05-23 15:46:58
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hong303030

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-23 16:22:42
可以试一下换一管新的酶再试一下，加入矿物油了吗？加了的话，应该不会蒸到管壁上吧，或者换一个PCR仪试一下，有可能是pcr仪热盖有问题，温度不稳定
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5楼2010-05-23 16:05:11
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):有可能 2010-05-23 16:22:32
同意楼上，首先解决热盖的问题，很有可能突然不出了，就是关闭了热盖，或者热盖坏了。
我感觉你现在管中的液体不是挂在管壁上，而是都蒸到管盖上了，那肯定什么都做不出来的，你观察一下
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6楼2010-05-23 16:09:34
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Kirsten_hkm

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by cqyniu at 2010-05-23 15:46:58:
是不是换了什么组分呢？你做PCR的时候是不是没有热盖啊

好像是没有热盖，原来是这个原因。我再去试试。非常感谢！
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7楼2010-05-23 16:44:36
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Kirsten_hkm

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lyg7720349 at 2010-05-23 15:17:14:
对于不出结果的问题，估计是你的酶有问题或者操作失误
   对于第二问题：你可能加好混合物P之前没有离心吧。

可是我确定每次都是离心之后再开始PCR的！
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8楼2010-05-23 16:45:51
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Kirsten_hkm

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by pan琳lin at 2010-05-23 15:36:14:
送你一篇：
    在出现PCR之前，传统的重组DNA技术是应用限制性内切核酸酶和连接酶通过切割和连接对DNA进行操作。而最通用的方法是T载体克隆。但这个方法有很多缺点，如限制酶的酶切位点有限、浓度不高（需要提很 ...

谢谢！很有用的东西！
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9楼2010-05-23 16:46:21
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Kirsten_hkm

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by hong303030 at 2010-05-23 16:05:11:
可以试一下换一管新的酶再试一下，加入矿物油了吗？加了的话，应该不会蒸到管壁上吧，或者换一个PCR仪试一下，有可能是pcr仪热盖有问题，温度不稳定

换了，可还是没有结果！
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10楼2010-05-23 16:47:00
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