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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于PCR的问题
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Kirsten_hkm

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-05-23 16:09:34:
同意楼上，首先解决热盖的问题，很有可能突然不出了，就是关闭了热盖，或者热盖坏了。
我感觉你现在管中的液体不是挂在管壁上，而是都蒸到管盖上了，那肯定什么都做不出来的，你观察一下

恩，是的，拿出来的时候感觉壁上也不太多，离心之后就达到PCR之前的体积了，那这样的问题是不是在一开始时候加热热盖就可以克服了？
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11楼2010-05-23 16:49:17
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有可能是你的模板反复冻融而发生了降解。换一下模板试试。
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12楼2010-05-23 16:55:44
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-23 22:20:54
引用回帖:
Originally posted by Kirsten_hkm at 2010-05-23 16:49:17:

恩，是的，拿出来的时候感觉壁上也不太多，离心之后就达到PCR之前的体积了，那这样的问题是不是在一开始时候加热热盖就可以克服了？

一开始加热热盖是对的，但是你现在可能整个过程没有热盖，或者热盖温度不对，你看一下你的设置，105度是正常热盖温度，除非你的实验有特殊说明，不然不要改动
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13楼2010-05-23 17:48:39
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pan琳lin

木虫 (职业作家)

小木虫水军秘书长

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by Kirsten_hkm at 2010-05-23 16:46:21:

谢谢！很有用的东西！

不客气，在论坛上就要积极点
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cptbtptp,bcptdtptp (吃葡萄不吐葡萄皮，不吃葡萄倒吐葡萄皮）
14楼2010-05-23 19:27:30
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-23 22:21:07
原因很多
模板浓度，引物有没有均匀稀释，酶的质量怎么样？有没有失活，退火温度和延伸时间设置，你可以做一个梯度试试，或者用两种酶同时做，也可以用你原来可以扩出来的引物进行pcr，一个一个排除！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
15楼2010-05-23 21:17:42
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yangtsecls

铁虫 (初入文坛)
这个问题，我很有发言权，我经历了和你一样的事情。
重新合成引物就没事了。
这种问题很多情况是引物出了问题。
建议你每次把引物放冰上。融化后用完立刻放回冰箱。
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16楼2010-05-23 23:20:13
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笑西少

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by lyg7720349 at 2010-05-23 15:17:14
对于不出结果的问题，估计是你的酶有问题或者操作失误
   对于第二问题：你可能加好混合物P之前没有离心吧。

应该不是离心的问题，我也P之前肯定离心的，但是管壁上还是有液滴。估计是盖子没有加热好
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天然产物化学
17楼2014-06-12 18:47:46
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笑西少

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hong303030 at 2010-05-23 16:05:11
可以试一下换一管新的酶再试一下，加入矿物油了吗？加了的话，应该不会蒸到管壁上吧，或者换一个PCR仪试一下，有可能是pcr仪热盖有问题，温度不稳定

我P之前离心了，也热盖了，但是P完了之后在PCR仪里面冷却到4度还是有液滴在管壁上。我还没有加过矿物油，请问矿物油具体是哪种啊？要加多少呢？谢谢！
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天然产物化学
18楼2014-06-12 18:49:21
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笑西少

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by Kirsten_hkm at 2010-05-23 16:44:36
好像是没有热盖，原来是这个原因。我再去试试。非常感谢！

我热盖后也是有液滴挂在管壁的，但是结果不受影响的啊
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天然产物化学
19楼2014-06-12 18:50:53
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