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Angela-Fish

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】双酶切质粒后,目的条带浅且前方有模糊亮带已有10人参与

今天做了个双酶切,用EcoR 1和HindIII对质粒进行双酶切,本来在紫外灯下应该是两条清晰的亮带,且短的是我的目的条带,但是电泳之后却是如下的:

宽条带底部的那条不是很清晰的条带是我的目的条带,请问泳道最前方的模糊的条带是什么东西呢,谢谢!
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yan2009 at 2010-05-13 08:38:47:
酶的专一性不强,重新订支新酶,质粒的纯度也不高,才会这样,重新转化质粒,大提后,测质粒浓度,至少达到750ng/ul,再做双酶切,可以成功,祝你好运!

有个小疑惑,对于质粒浓度
一般的克隆不需要这么高的要求吧?
特别是表达载体如pET28,复制量没有克隆载体高。一般试剂盒小提2ml用30ul水洗脱质粒浓度在100ng/ul左右,双酶切8ul做胶回收就很够用了
是做什么实验质粒浓度至少要达到750ng/ul?
终于熬成木虫了……
10楼2010-05-14 05:00:10
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pidou213

木虫 (正式写手)

是不是没有切完的基因呢??或者说没有切下来
见得多爱的多
2楼2010-05-12 23:21:05
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-05-13 06:43:03
切的是质粒吗?
如果切的是质粒,质粒是如何提取的?RNAse何时加的?
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
3楼2010-05-12 23:29:24
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tmvb

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-05-13 06:42:44
是不是你的酶切专属性不强啊,切出了多个片段
4楼2010-05-12 23:35:39
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