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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双酶切质粒后，目的条带浅且前方有模糊亮带
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Angela-Fish

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】双酶切质粒后，目的条带浅且前方有模糊亮带 已有10人参与

今天做了个双酶切，用EcoR 1和HindIII对质粒进行双酶切，本来在紫外灯下应该是两条清晰的亮带，且短的是我的目的条带，但是电泳之后却是如下的：

宽条带底部的那条不是很清晰的条带是我的目的条带，请问泳道最前方的模糊的条带是什么东西呢，谢谢！
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1楼 2010-05-12 21:54:41
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Angela-Fish

新虫 (初入文坛)
★ ★
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-05-13 06:42:32
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2010-05-12 23:21:05:
是不是没有切完的基因呢？？或者说没有切下来

应该不是，如果基因没切完全，或者只是单酶切，那应该是线状的，相对分子质量应该还是挺大的，条带也是在后面的，不可能跑到最前面啊
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5楼2010-05-13 00:04:59
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Angela-Fish

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 香菱儿 at 2010-05-12 23:29:24:
切的是质粒吗？
如果切的是质粒，质粒是如何提取的？RNAse何时加的？

是质粒啊，是师哥提供的质粒，该质粒已经确定是连接了目的片段的载体质粒，我现在就是要把这个目的片段切下来。RNAase我不太清楚加了没有，不过我觉得应该不是这个问题吧。和这个一批做的另外一个连接有相似片段的同样的载体质粒，同样双酶切后就出现了清晰的两条带。我不知道是不是质粒存放过程中受到了核酶的污染啊。这些质粒都是在EP管里存放于-20度里的。
神啊，这是为什么呢~~
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6楼2010-05-13 00:12:01
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