| 查看: 1971 | 回复: 22 | |||
[交流]
【求助/交流】求助!大家帮我看一下我的PCR体系有什么问题没? 已有16人参与
|
|
我最近在做一种未知菌的16SRDNA的PCR,一直没做出来,大家帮我看一下到底是哪里出现了问题? PCR体系: 模板 5uL 上游引物(2.5uM) 5uL Tm 57.8 下游引物(2.5uM) 5uL Tm61.9 Mgcl2(50mM) 3 uL 10*PCR buffer 5uL dNTP (2.5mM ) 1uL Taq酶(2u/ul) 1uL ddH2O 25uL 反应程序: 95(5m) 95(1m) 53(1m) 73(2m) 72(10m) 30个循环. 结果P不出来,并且我也不知道P出来的条带应该是多少bp?大家帮我分析分析吧,只有10个金币全送上. 他们给我的引物合成书上的TM值是: 上游引物 Tm 57.8 下游引物 Tm61.9 但是我根据TM=4(G+C)+2(A+T)引物长都为20BP,算出来的 上游引物 Tm 60 下游引物 Tm64 所以我的程序退火温度应该是多少呢?53会不会太低了? [ Last edited by wwsw38 on 2010-4-23 at 21:56 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有124人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有没有人碰到过这样的PCR问题？求助
已经有6人回复
- 质粒DNA提取成了这样，请大家帮忙分析一下
已经有27人回复
- 表达载体的构建
已经有17人回复
- 【求助】有人在做焦磷酸测序么？希望得到大虾的帮助
已经有13人回复
- 【求助】外导已发邀请信，正在谈学习计划。麻烦大家帮我看一下这句话是什么意思。
已经有13人回复
- 【求助/交流】菌落PCR问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】PCR反应体系请教！
已经有13人回复
- 【求助/交流】PCR产物的琼脂糖电泳图片
已经有27人回复
- 【求助/交流】pcr体系酶与反应体系分开
已经有6人回复
- 【求助/交流】PCR反应体系的配制
已经有11人回复
- 【求助/交流】5'Race反复做不出来，该怎么办
已经有74人回复
- 【求助/交流】关于PCR的问题
已经有18人回复
- 【求助/交流】有关菌液PCR的问题
已经有14人回复
2楼2010-04-23 15:00:20
bihaiqingt
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1329.1
- 散金: 948
- 红花: 10
- 帖子: 197
- 在线: 119.3小时
- 虫号: 949702
- 注册: 2010-01-28
- 专业: 生物化学
3楼2010-04-23 15:54:08
bihaiqingt
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1329.1
- 散金: 948
- 红花: 10
- 帖子: 197
- 在线: 119.3小时
- 虫号: 949702
- 注册: 2010-01-28
- 专业: 生物化学
4楼2010-04-23 15:56:14
hyde0706
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2849.7
- 散金: 103
- 帖子: 389
- 在线: 57.5小时
- 虫号: 815507
- 注册: 2009-07-25
- 专业: 遗传学研究新技术与方法
5楼2010-04-23 15:58:09
dfl204
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 23 (小学生)
- 金币: 9535.1
- 散金: 1819
- 红花: 7
- 帖子: 1141
- 在线: 329.2小时
- 虫号: 414815
- 注册: 2007-06-28
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
6楼2010-04-23 16:00:36
liyong1981 
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 774.1
- 散金: 116
- 帖子: 905
- 在线: 35.2小时
- 虫号: 357405
- 注册: 2007-04-27
- 性别: GG
- 专业: antibody
7楼2010-04-23 16:01:12
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
8楼2010-04-23 16:02:36
9楼2010-04-23 16:17:45
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
10楼2010-04-23 16:32:13
