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【求助/交流】求助!大家帮我看一下我的PCR体系有什么问题没? 已有16人参与
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我最近在做一种未知菌的16SRDNA的PCR,一直没做出来,大家帮我看一下到底是哪里出现了问题? PCR体系: 模板 5uL 上游引物(2.5uM) 5uL Tm 57.8 下游引物(2.5uM) 5uL Tm61.9 Mgcl2(50mM) 3 uL 10*PCR buffer 5uL dNTP (2.5mM ) 1uL Taq酶(2u/ul) 1uL ddH2O 25uL 反应程序: 95(5m) 95(1m) 53(1m) 73(2m) 72(10m) 30个循环. 结果P不出来,并且我也不知道P出来的条带应该是多少bp?大家帮我分析分析吧,只有10个金币全送上. 他们给我的引物合成书上的TM值是: 上游引物 Tm 57.8 下游引物 Tm61.9 但是我根据TM=4(G+C)+2(A+T)引物长都为20BP,算出来的 上游引物 Tm 60 下游引物 Tm64 所以我的程序退火温度应该是多少呢?53会不会太低了? [ Last edited by wwsw38 on 2010-4-23 at 21:56 ] |
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