24小时热门版块排行榜    

查看: 1323  |  回复: 6

焦毅

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于构建重组质粒 已有5人参与

我用overlap PCR做出一段1 kb 的片段,片段两端分别设计了BamHI和SacI酶切位点,载体原长6800bp,用BamHI和SacI切掉40bp暴露黏性末端,切完跑胶验证是切断的。用T4连接酶连接到载体上,然后转到大肠杆菌以后一直长不出来。怎样判断是哪一步出了问题?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

江灵敏

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
感受态可能有问题,试试

发自小木虫Android客户端
2楼2017-07-22 09:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

焦毅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 江灵敏 at 2017-07-22 09:49:37
感受态可能有问题,试试

感受态没问题,做的对照可以长出来
3楼2017-07-22 09:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
overlap PCR有没有保护碱基?pcr产物是不是也切了?
4楼2017-07-22 21:14:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-23 09:25:25
本帖仅楼主可见
5楼2017-07-22 22:21:03
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

hubinghello

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-24 07:48:01
做的酶切位点要有保护碱基,你切片段产物只切掉几十个bp,怎么跑胶确定是切段的啊;
应该是连接这一步的问题,注意连接时载体和片段的摩尔比例,比较重要。
去爱吧,像不曾爱过一样;跳舞吧,像没有人观看一样;唱歌吧,像没有人聆听一样;生活吧,像每天都是世界末日一样;赚钱吧,像不是为了钱一样。
6楼2017-07-23 15:35:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叶心飞翔

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我觉得可能的原因如下:
1,PCR产物可能酶切没有完全,导致连接效率太低。
2,感受态效率偏低。
祝好!
7楼2017-07-24 13:02:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 焦毅 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 高分子化学与物理调剂 +4 好好好1233 2026-02-28 8/400 2026-03-01 09:26 by 好好好1233
[考研] 291分工科求调剂 +5 science饿饿 2026-03-01 5/250 2026-03-01 09:19 by L135790
[考研] 0856求调剂285 +5 吕仔龙 2026-02-28 5/250 2026-03-01 09:18 by L135790
[考研] 284求调剂 +5 天下熯 2026-02-28 5/250 2026-03-01 08:49 by ms629
[考研] 285求调剂 +6 满头大汗的学生 2026-02-28 6/300 2026-03-01 06:29 by Trying]
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 材料学调剂 +5 提神豆沙包 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:34 by gaoxiaoniuma
[考研] 311求调剂 +8 南迦720 2026-02-28 8/400 2026-02-28 21:30 by gaoxiaoniuma
[考研] 298求调剂 +8 人间唯你是清欢 2026-02-28 11/550 2026-02-28 20:26 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[考研] 寻找调剂 +3 LYidhsjabdj 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:59 by miniwendy
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[基金申请] 面上可以超过30页吧? +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见