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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 做质粒重组的虫友们请看这
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吗子

金虫 (小有名气)

[交流] 做质粒重组的虫友们请看这

小弟最近一直在构建载体，用的是限制性酶切克隆，之前已顺利构建了一个载体。
但是最近将另一个基因连接于表达载体上的时候，目的基因已经获得并已纯化，表达载体也切开并纯化了，
连接的时候换了各种连接比例，但结果一直是连接不上（用的TAKARA的T4连接酶），已经连续近三个月失败，几近奔溃。亦被老板嫌弃多次。。。
在查了一些资料及请教了一些前辈之后，他们建议选择其他克隆方式，比如无缝连接(In-Fusion Cloning),好像还有相应的重组KIT。
我也打算试试了，不能一棵树上吊死啊。

现抽空发帖与各位做重组的虫友们交流讨论，做得好的，希望大家分享宝贵经验；和我一样苦逼做不出来的也希望互相学习，都是为了试验顺利。
关于质粒重组的好方法希望大家多多发表下宝贵意见吧。50金币大家不要嫌少。。。。
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深秋
1楼 2015-09-02 16:21:17
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

假大空

木虫之王 (文学泰斗)
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7楼2015-09-02 16:51:21
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普通回帖

匿名
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吗子(金币+1): 谢谢参与
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2楼2015-09-02 16:24:17
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dmbb
★
吗子(金币+1): 谢谢参与
3楼2015-09-02 16:28:28
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qqllqq
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吗子(金币+1): 谢谢参与
4楼2015-09-02 16:30:08
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psylhh
★
吗子: 金币+1 2015-09-05 20:39:04
5楼2015-09-02 16:37:35
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月伴沙滩
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吗子: 金币+1 2015-09-05 20:39:07
6楼2015-09-02 16:45:40
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raoreng
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omnist
★
吗子: 金币+1 2015-09-05 20:39:13
9楼2015-09-02 16:53:07
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chenyuanxmc

金虫 (著名写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
吗子: 金币+5 2015-09-05 20:39:23
插入片段和载体的浓度稍微大点进行连接，后期用pcr筛选，祝顺利

发自小木虫Android客户端
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10楼2015-09-02 16:57:41
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