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stl409
★
吗子: 金币+1 2015-09-05 20:40:32
21楼2015-09-02 19:36:06
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小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-09-05 22:59:18
250bp的片段很好连，酶切完了跑电泳的时候时间短点，只要和t载体分开就行，150v，10分钟吧(因为250bp的片段你电泳时间长的话条带就有些发虚了)。还有原因小片段的酶切效率偏低（个人经验），所以你多做酶切的策略是正确的，如果你胶回收得率低，可以讲这些酶切产物胶回收的时候可以分成4份，3个胶块融在一个管里，分别过柱子，最后洗脱的时候可以用30～40ul的洗脱液洗2个柱子（或者3个，4个等），这样提高回收产率。

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22楼2015-09-02 20:17:23
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亦岳9863
23楼2015-09-02 21:16:52
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gaolt

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
吗子: 金币+1 2015-09-05 20:41:04
延长链接时间看看
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24楼2015-09-03 12:15:59
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Tama二等兵

新虫 (初入文坛)
★
吗子: 金币+1 2015-09-05 20:41:07
体外同源重组
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25楼2015-09-04 10:00:33
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lianfeng1107

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
吗子: 金币+1 2015-09-05 20:41:13
会不会是你的抗性板加的搞生素浓度高了？降降 浓度试试。。。。
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26楼2015-09-05 09:39:31
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吗子

金虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by lianfeng1107 at 2015-09-05 09:39:31
会不会是你的抗性板加的搞生素浓度高了？降降 浓度试试。。。。

已经降低了的
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深秋
27楼2015-09-05 20:34:36
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wuwenmei

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
吗子: 金币+5, 顺利的话很快啊，但是就是不顺利。分析很久都没有解决。 你用的是什么酶什么体系呢 2015-09-05 20:44:21
这个还好吧，我反正挺幸运的，每次都是PCR直接双酶切回收，然后直接与双酶切回收的载体连，虽然长的不多，不过每次都能连上，很快的，幸运的话两天就搞定了，
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下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！
28楼2015-09-05 20:36:09
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吗子

金虫 (小有名气)
引用回帖:
25楼: Originally posted by Tama二等兵 at 2015-09-04 10:00:33
体外同源重组

具体怎么做呢
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深秋
29楼2015-09-05 20:40:54
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
吗子: 金币+3, 好的，谢谢 2015-09-05 22:20:30
可以参考这篇改良的T4连接方法试一试
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    • 2015-09-05 20:41:57, 578.51 K
。
30楼2015-09-05 20:41:59
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