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吗子

金虫 (小有名气)

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专业: 农业昆虫学

[交流] 做质粒重组的虫友们请看这

小弟最近一直在构建载体，用的是限制性酶切克隆，之前已顺利构建了一个载体。
但是最近将另一个基因连接于表达载体上的时候，目的基因已经获得并已纯化，表达载体也切开并纯化了，
连接的时候换了各种连接比例，但结果一直是连接不上（用的TAKARA的T4连接酶），已经连续近三个月失败，几近奔溃。亦被老板嫌弃多次。。。
在查了一些资料及请教了一些前辈之后，他们建议选择其他克隆方式，比如无缝连接(In-Fusion Cloning),好像还有相应的重组KIT。
我也打算试试了，不能一棵树上吊死啊。

现抽空发帖与各位做重组的虫友们交流讨论，做得好的，希望大家分享宝贵经验；和我一样苦逼做不出来的也希望互相学习，都是为了试验顺利。