24小时热门版块排行榜    

查看: 1341  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

焦毅

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于构建重组质粒 已有5人参与

我用overlap PCR做出一段1 kb 的片段,片段两端分别设计了BamHI和SacI酶切位点,载体原长6800bp,用BamHI和SacI切掉40bp暴露黏性末端,切完跑胶验证是切断的。用T4连接酶连接到载体上,然后转到大肠杆菌以后一直长不出来。怎样判断是哪一步出了问题?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叶心飞翔

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我觉得可能的原因如下:
1,PCR产物可能酶切没有完全,导致连接效率太低。
2,感受态效率偏低。
祝好!
7楼2017-07-24 13:02:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

江灵敏

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
感受态可能有问题,试试

发自小木虫Android客户端
2楼2017-07-22 09:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

焦毅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 江灵敏 at 2017-07-22 09:49:37
感受态可能有问题,试试

感受态没问题,做的对照可以长出来
3楼2017-07-22 09:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
overlap PCR有没有保护碱基?pcr产物是不是也切了?
4楼2017-07-22 21:14:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[考研] 07化学280分求调剂 +7 722865 2026-03-23 7/350 2026-03-25 09:29 by aa331100
[考研] 化学调剂 +6 yzysaa 2026-03-21 6/300 2026-03-25 09:27 by aa331100
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 8/400 2026-03-25 08:02 by 噜gkvc
[考研] 293求调剂 +6 加一一九 2026-03-24 6/300 2026-03-24 14:29 by JourneyLucky
[考研] 305分求调剂(食品工程) +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境,总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪!?!
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 求调剂一志愿海大,0703化学学硕304分,有大创项目,四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见