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十字幻影

木虫 (正式写手)

小小龙

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[求助] PCR非特异性扩增已有1人参与

如图，4，8泳道为对照，跑的很好，没有非特异性扩增。但为何其他泳道都有多条非特异性扩增？如果是退火温度不合适，不应该全部都是非特异性扩增吗？请大神指教～

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脚踏实地，仰望星空

1楼 2017-06-08 22:40:21

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makira

铜虫 (初入文坛)

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虫号: 2287803
注册: 2013-02-19
专业: 生物大分子结构与功能

像楼主所说，4号、8号泳道为对照，跑的很好，没有非特异性扩增。尤其是5-7号泳道出现非特异扩增。猜想原因如下：是因为对照DNA的浓度较高，PCR体系比较适合于对照DNA的扩增；但其余泳道由于DNA浓度低，在同样的反应体系下，相对来看，剩余的组分就易产生非特异扩增。建议先适当稀释对照DNA的浓度，再对PCR体系进行摸索。