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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR有很多非特异性扩增，目的条带特别淡
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nishang811

新虫 (小有名气)

[求助] PCR有很多非特异性扩增，目的条带特别淡 已有1人参与

最近开始做PCR,模板是基因组DNA,模板GC含量百分之72，tm60度，用taq酶扩增，一开始用60度扩，都扩出来但是目的条带很淡，做了个梯度，50到60度，结果只有55度有条带，后来用55度P了几次，换了引物模板浓度，还是一样。 怎么办
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1楼 2015-07-17 20:38:58
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ppppppppp

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-18 13:03:16
GC含量确实高了点。建议用takara的GC buffer试试，当然前提是用takara的酶。

还有就是条带杂的解决方法：把引物设计长一些，提高退火温度，有利于减少非特异性条带

不知道你的tm值是多少，比较高的话简体在60以上做一梯度试试

实在懒得换的话，做他10份，切胶回收就可以了。。

希望对你有帮助
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初来乍到，请多指教
2楼2015-07-17 22:14:26
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