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nishang811

新虫 (小有名气)

[求助] PCR有很多非特异性扩增,目的条带特别淡 已有1人参与

最近开始做PCR,模板是基因组DNA,模板GC含量百分之72,tm60度,用taq酶扩增,一开始用60度扩,都扩出来但是目的条带很淡,做了个梯度,50到60度,结果只有55度有条带,后来用55度P了几次,换了引物模板浓度,还是一样。 怎么办
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新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-07-18 13:03:16
GC含量确实高了点。建议用takara的GC buffer试试,当然前提是用takara的酶。

还有就是条带杂的解决方法:把引物设计长一些,提高退火温度,有利于减少非特异性条带

不知道你的tm值是多少,比较高的话简体在60以上做一梯度试试

实在懒得换的话,做他10份,切胶回收就可以了。。

希望对你有帮助
初来乍到,请多指教
2楼2015-07-17 22:14:26
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