| 查看: 19668 | 回复: 37 | |||
[交流]
同源重组载体构建
|
|||
| 使用一步克隆法（同源重组）构建载体，经转化后能在氨苄培养皿长出上百个的菌落，菌落PCR结果显示有阳性，但是测序结果却一直不对。请各路大神指教。 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有87人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
有关pPICZA、pPIC9K酵母表达质粒如何正确构建载体表达蛋白
已经有6人回复- 基因敲除第一步同源重组后用上下游基因的两头引物同时扩增怎么只出现了一个条带
已经有5人回复
- 本人试验是同源重组载体构建，载体构建好后该怎么进行试验。。。
已经有3人回复
- 希望对正在构建载体的虫友有点帮助
已经有12人回复
- 怎么使线性腺病毒基因组环化？如果采用同源重组的方法，右侧同源臂只有200bp够么？
已经有0人回复
- 请各位大牛看下整个过程哪有问题？同源重组基因敲除
已经有8人回复
- 分子克隆效率求助！！各种载体构建
已经有8人回复
- 基因敲除打靶载体构建
已经有8人回复
- 请问能否在已经构建好的腺病毒载体上插入一个片段，使其表达两个目的蛋白？
已经有1人回复
- 有用同源重组法进行基因克隆和载体构建的吗？
已经有8人回复
- 基因敲入，同源重组
已经有10人回复
- 求助同源重组基因敲除的非抗生素筛选标记的选择
已经有2人回复
- 求助链霉菌基因敲除同源重组的方法
已经有1人回复
- 求助链霉菌基因敲除同源重组的方法
已经有1人回复
- 做基因敲除同源重组时交换臂有1、2个位点突变会对交换有影响吗？
已经有1人回复
- 细菌同源重组进行基因敲除的同源臂最小需要多少
已经有10人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
双面压敏硅胶胶带
+2/98
-
加拿大/英属哥伦比亚大学曹彦凯课题组招收全奖博士/博后 [机器学习/优化/控制方向]
+1/95
-
湘潭大学化学学院理论与计算化学课题组裴勇教授招生博士生2名
+2/88
-
真诚脱单
+1/86
-
坐标山东东营，诚征女友
+1/85
-
招收26年资源与环境领域、生物质生物转化、生物技术等方向博士研究生
+1/81
-
双一流大学湘潭大学“化工过程模拟与强化”国家地方联合工程研究中心招收各类博士生
+1/34
-
2026博士申请-药物化学方向（小分子化合物合成）
+1/32
-
中山大学医学院(深圳)肿瘤细胞生物课题组招收联培（客座）硕士/博士生
+1/31
-
中山大学院士团队王来源教授课题组招聘博士后
+2/16
-
中国科大-合肥国家实验室冷原子量子中继团队招聘启事
+2/10
-
长江大学武汉校区诚招新能源博士（工程热物理、电气、油气）-2025
+1/8
-
湖南大学2026博士招生
+1/7
-
美国圣母大学张艳良教授诚招全奖博士生
+2/6
-
欢迎报考中山大学课题组，提供2025-2026级硕士研究生名额
+1/6
-
三峡集团科研院海上风电研究项目实习生招聘公告
+1/4
-
东莞理工学院-大连化物所联合招聘光催化方向博士后2名（年薪48W）
+1/4
-
安捷伦气相色谱处理方法求助
+1/1
-
南华大学基础医学——抗感染药理-活性先导化合物抗菌作用机制研究申请审核制博士1名
+1/1
-
兰州大学物理学院韩卫华教授课题组招收 2026年博士研究生 (物理、电子以及核能源方向)
+1/1
23楼2017-04-17 00:58:21
5楼2017-04-14 13:23:52
16楼2017-04-14 14:48:25
17楼2017-04-14 15:41:03
18楼2017-04-14 15:54:01
19楼2017-04-15 22:56:23
20楼2017-04-16 13:55:08
21楼2017-04-16 19:55:25
22楼2017-04-16 23:22:04
24楼2017-04-17 00:59:09
25楼2017-04-17 01:02:15
26楼2017-08-30 23:13:04
27楼2017-08-31 09:00:16
28楼2017-08-31 09:00:53
29楼2017-09-08 10:52:33
30楼2017-11-24 18:13:44
31楼2017-11-24 18:15:15
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
菌落PCR阳性不能说明什么问题，因为可能是假阳性。同源重组成功的基础是，你的重组片段纯度很好，浓度测量要准确，我一般在连接前会把各个片段再跑一次胶看看目的条带是否单一且亮，你得载体片段扩增下来后必须用DpnI消化载体质粒的模板，减少在板子上长出来的空质粒 发自小木虫Android客户端 |
32楼2017-11-24 18:24:24
33楼2017-11-25 23:24:03
34楼2017-11-26 09:17:59
|
本帖内容被屏蔽 |
37楼2018-07-07 21:52:48
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
大佬，想请问一下，我现有一个4500bp左右质粒，想利用同源重组插入一个EGFP片段，大概700bp，用这个质粒分别P两个片段，一个EGFP 700bp，一个骨架 4000bp,50ul体系PCR之后跑胶条带在预期位置，很亮且单一，切胶后同时做胶回收，回收产物测定浓度，700的那个有320ng/ul，有单一峰；4000的那个浓度只有13ng/ul且无峰？？重复2次，还是同样的结果，都是超低浓度且无峰值，没办法了就用乙醇沉淀回收，浓度很高但有较多杂质，将以上两个片段经同源重组酶重组后转化大肠杆菌，转出来的都是模板质粒菌，用DpnI消化载体质粒的模板后，再做出来的基本是个阴性板了，求大神指点到底是哪里出了问题，跪谢 |
38楼2018-08-16 12:28:09
简单回复
纳米材料7532楼
2017-04-14 11:21
回复
努力奋进潇洒(金币+1): 谢谢参与
你在思念谁3楼
2017-04-14 11:21
回复
努力奋进潇洒(金币+1): 谢谢参与
n 发自小木虫Android客户端
2017-04-14 11:26
回复
努力奋进潇洒(金币+1): 谢谢参与
祝福
不闹眼子的我6楼
2017-04-14 13:40
回复
努力奋进潇洒(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫IOS客户端
也是小白7楼
2017-04-14 13:59
回复
努力奋进潇洒(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
2017-04-14 14:15
回复
努力奋进潇洒(金币+1): 谢谢参与
2017-04-14 14:19
回复
努力奋进潇洒(金币+1): 谢谢参与
tzynew10楼
2017-04-14 14:24
回复
努力奋进潇洒(金币+1): 谢谢参与
龙飞哥11楼
2017-04-14 14:27
回复
努力奋进潇洒(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫Android客户端
nono200912楼
2017-04-14 14:28
回复
努力奋进潇洒(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
田园STYLE13楼
2017-04-14 14:29
回复
xxl520zry14楼
2017-04-14 14:35
回复
幸运观众15楼
2017-04-14 14:44
回复
努力奋进潇洒(金币+1): 谢谢参与
^_^ 发自小木虫IOS客户端
cl2_200735楼
2017-12-18 15:27
回复
cl2_200736楼
2018-01-07 00:01
回复
