24小时热门版块排行榜    

查看: 1144  |  回复: 3

时光、过客

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助,载体构建一直不成功!我的载体是9k,目的基因1.5k 已有2人参与

连接转化一直不成功,第一次连接pcr产物连不上,然后就连到T载上,连到T载后双酶切再连接结果还是不成功,阳性转化正常,有一次长了一个单菌落居然是空载!不知道是什么原因!

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

时光、过客

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 时光、过客 at 2017-03-23 11:48:29
连接转化一直不成功,第一次连接pcr产物连不上,然后就连到T载上,连到T载后双酶切再连接结果还是不成功,阳性转化正常,有一次长了一个单菌落居然是空载!不知道是什么原因!
...

同时问一下,我的载体和目的片段连接时浓度多少比较合适??

发自小木虫Android客户端
2楼2017-03-23 11:52:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是没连上,你可以适当多加一些片段,载体和片段摩尔比在1:5-1:10应该可以了
···
3楼2017-03-23 14:50:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以考虑用无缝克隆(我们做了一个无缝克隆试剂盒,效率还不错,比普通酶切连接强多了)。另外,如果你用酶切连接的话,一定要注意载体和片段的浓度,以及回收产物260/280比值在1.8-2.0之间,260/230比值尽量接近于2.0(低于1.2的话就不用做了,至少也要1.5以上做连接才比较好)
good luck
4楼2017-03-23 20:44:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 时光、过客 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 CyTWnZiM0cS6 2026-08-02 5/250 2026-08-02 20:52 by 3VGOm6paSgqv
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 CyTWnZiM0cS6 2026-08-02 5/250 2026-08-02 20:43 by 3VGOm6paSgqv
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 5/250 2026-08-02 20:32 by 3VGOm6paSgqv
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 5/250 2026-08-02 20:31 by 3VGOm6paSgqv
[找工作] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 5/250 2026-08-02 20:31 by 3VGOm6paSgqv
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 8/400 2026-08-02 20:24 by 3VGOm6paSgqv
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 12/600 2026-08-02 20:21 by drbart
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 6/300 2026-08-02 20:14 by 3VGOm6paSgqv
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 10/500 2026-08-02 20:12 by 3VGOm6paSgqv
[找工作] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 13/650 2026-08-02 20:04 by 3VGOm6paSgqv
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 17/850 2026-08-02 20:03 by 3VGOm6paSgqv
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 21/1050 2026-08-02 19:52 by 3VGOm6paSgqv
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 8/400 2026-08-02 18:44 by ca3DVAx4OB19
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 20/1000 2026-08-02 18:04 by ca3DVAx4OB19
[基金申请] 准备明年的基金了 +7 Tide man 2026-07-27 7/350 2026-08-02 16:43 by gltch
[基金申请] 面上再次挂了,太难了,躺也躺不了,倦也卷不过,小学校之殇! +18 低垂的野花 2026-07-31 24/1200 2026-08-02 16:03 by swallowwh
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +15 布布和一二 2026-07-30 21/1050 2026-08-02 10:56 by iaeyuan
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液,是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
信息提示
请填处理意见