24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1063  |  回复: 3

时光、过客

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 求助,载体构建一直不成功!我的载体是9k,目的基因1.5k 已有2人参与

连接转化一直不成功,第一次连接pcr产物连不上,然后就连到T载上,连到T载后双酶切再连接结果还是不成功,阳性转化正常,有一次长了一个单菌落居然是空载!不知道是什么原因!

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

时光、过客

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
1楼: Originally posted by 时光、过客 at 2017-03-23 11:48:29
连接转化一直不成功,第一次连接pcr产物连不上,然后就连到T载上,连到T载后双酶切再连接结果还是不成功,阳性转化正常,有一次长了一个单菌落居然是空载!不知道是什么原因!
...

同时问一下,我的载体和目的片段连接时浓度多少比较合适??

发自小木虫Android客户端
2楼2017-03-23 11:52:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

无虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是没连上,你可以适当多加一些片段,载体和片段摩尔比在1:5-1:10应该可以了
···
3楼2017-03-23 14:50:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以考虑用无缝克隆(我们做了一个无缝克隆试剂盒,效率还不错,比普通酶切连接强多了)。另外,如果你用酶切连接的话,一定要注意载体和片段的浓度,以及回收产物260/280比值在1.8-2.0之间,260/230比值尽量接近于2.0(低于1.2的话就不用做了,至少也要1.5以上做连接才比较好)
good luck
4楼2017-03-23 20:44:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 时光、过客 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0817化工学硕调剂 +8 努力上岸中! 2026-03-31 8/400 2026-04-01 16:55 by oooqiao
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-30 14/700 2026-04-01 16:41 by Ccclqqq
[考研] 调剂推荐 +9 清酒714 2026-03-26 10/500 2026-04-01 16:25 by yanflower7133
[考研] 0703求调剂 +4 zizimo 2026-03-31 4/200 2026-04-01 16:04 by yanflower7133
[考研] 环境工程调剂 +9 hyzzzzzzz. 2026-04-01 9/450 2026-04-01 14:20 by salamander`
[考研] 275求调剂 +7 waltzh 2026-04-01 7/350 2026-04-01 11:23 by 无际的草原
[考研] 301求调剂 +8 axibli 2026-04-01 8/400 2026-04-01 09:51 by 我的船我的海
[考研] 土木304求调剂 +3 兔突突突, 2026-03-31 3/150 2026-04-01 09:42 by JourneyLucky
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +10 @taotao 2026-03-29 10/500 2026-04-01 09:30 by oooqiao
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +5 双马尾痞老板2 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:04 by oooqiao
[考研] 求调剂:085600材料与化工,考材科基,总分319 +17 678lucky 2026-03-31 21/1050 2026-04-01 01:40 by 1018329917
[考研] 材料工程专硕求调剂 +10 hyl3153942 2026-03-29 10/500 2026-03-31 16:31 by hypershenger
[考研] 277跪求调剂 +8 1915668 2026-03-27 13/650 2026-03-31 14:58 by 王亮_大连医科大
[考研] 本科211安全工程,初试290分,求调剂 +3 2719846834 2026-03-28 3/150 2026-03-31 13:52 by 热情沙漠
[考研] 085404 22408 315分 +5 zhuangyan123 2026-03-31 6/300 2026-03-31 13:48 by limeifeng
[考研] 370求调剂 +3 080700调剂 2026-03-30 3/150 2026-03-31 01:09 by A_Zhe
[考研] 环境科学与工程334分求调剂 +6 王一一依依 2026-03-30 8/400 2026-03-30 11:52 by yjolah
[考研] 一志愿中南大学化学0703总分337求调剂 +6 niko- 2026-03-27 6/300 2026-03-30 10:25 by herarysara
[考研] 299求调剂 +10 15188958825 2026-03-25 10/500 2026-03-29 17:51 by 王亮_大连医科大
[考研] 一志愿南京航空航天大学材料学硕求调剂 +3 @taotao 2026-03-28 3/150 2026-03-28 10:26 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见