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zhangleisdau

铁虫 (正式写手)

[求助] 求助:T4 DNA聚合酶用于LIC克隆,出现问题? 已有1人参与

在构建LIC载体的过程中出现了问题,目的片段一直连接不上LIC载体。希望大家帮帮忙啊!

如图所示,将LIC载体用PstI酶切后,产生如图①所示的质粒,然后用T4 DNA聚合酶和dTTP处理,应当出现图②所示的质粒,出现LIC的粘性末端。但是PstI酶切质粒产生的3`粘性末端中含有T碱基(图③),T4 DNA聚合酶在只含有dTTP的情况下,遇到T就不能进行3`→5`的核甘酸外切,就不能产生LIC的粘性末端,不能与目的片段连接。 所以是不是中间还要有一步去除掉PstI酶切质粒产生的粘性末端,然后才能用T4 DNA聚合酶进行处理?还是T4 DNA聚合酶可以对3`端单链进行外切?各位大侠有做过的吗?
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远方天空

铜虫 (初入文坛)

请问一下你的这个问题解决了吗?我现在也遇到了同意的问题,希望得到帮助,谢谢您。

发自小木虫Android客户端
2楼2017-02-16 08:13:28
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ivanyang0607

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问您的问题现在解决了吗?我想寻求一份LIC构建的具体步骤,谢谢。
3楼2017-09-13 10:48:52
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ivanyang0607

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 远方天空 at 2017-02-16 08:13:28
请问一下你的这个问题解决了吗?我现在也遇到了同意的问题,希望得到帮助,谢谢您。

您好,我才开始了解LIC构建,想了解一下构建过程中的详细步骤及实验条件。谢谢!
4楼2017-09-13 10:54:20
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