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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：T4 DNA聚合酶用于LIC克隆,出现问题？
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zhangleisdau

铁虫 (正式写手)

[求助] 求助：T4 DNA聚合酶用于LIC克隆,出现问题？ 已有1人参与

在构建LIC载体的过程中出现了问题，目的片段一直连接不上LIC载体。希望大家帮帮忙啊！

如图所示，将LIC载体用PstI酶切后，产生如图①所示的质粒，然后用T4 DNA聚合酶和dTTP处理，应当出现图②所示的质粒，出现LIC的粘性末端。但是PstI酶切质粒产生的3`粘性末端中含有T碱基（图③），T4 DNA聚合酶在只含有dTTP的情况下，遇到T就不能进行3`→5`的核甘酸外切，就不能产生LIC的粘性末端，不能与目的片段连接。 所以是不是中间还要有一步去除掉PstI酶切质粒产生的粘性末端，然后才能用T4 DNA聚合酶进行处理？还是T4 DNA聚合酶可以对3`端单链进行外切？各位大侠有做过的吗？
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1楼 2013-01-22 16:43:28
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远方天空

铜虫 (初入文坛)
请问一下你的这个问题解决了吗？我现在也遇到了同意的问题，希望得到帮助，谢谢您。

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2楼2017-02-16 08:13:28
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ivanyang0607

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问您的问题现在解决了吗？我想寻求一份LIC构建的具体步骤，谢谢。
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3楼2017-09-13 10:48:52
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ivanyang0607

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 远方天空 at 2017-02-16 08:13:28
请问一下你的这个问题解决了吗？我现在也遇到了同意的问题，希望得到帮助，谢谢您。

您好，我才开始了解LIC构建，想了解一下构建过程中的详细步骤及实验条件。谢谢！
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4楼2017-09-13 10:54:20
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