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求助：T4 DNA聚合酶用于LIC克隆,出现问题？ 已有1人参与
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在构建LIC载体的过程中出现了问题，目的片段一直连接不上LIC载体。希望大家帮帮忙啊！ 如图所示，将LIC载体用PstI酶切后，产生如图①所示的质粒，然后用T4 DNA聚合酶和dTTP处理，应当出现图②所示的质粒，出现LIC的粘性末端。但是PstI酶切质粒产生的3`粘性末端中含有T碱基（图③），T4 DNA聚合酶在只含有dTTP的情况下，遇到T就不能进行3`→5`的核甘酸外切，就不能产生LIC的粘性末端，不能与目的片段连接。 所以是不是中间还要有一步去除掉PstI酶切质粒产生的粘性末端，然后才能用T4 DNA聚合酶进行处理？还是T4 DNA聚合酶可以对3`端单链进行外切？各位大侠有做过的吗？ |
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