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用基因组dna扩增长度约为7.8kb的片段，一直扩不出来，求助 已有4人参与
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| 用过GC buffer，出现许多非特异性条带，分成两段扩过，后面一段扩出来了，前面的一段扩不出来。由于是要构建载体用的，已经加了酶切识别的引物接头，扩了好多天了，试过两步法：95° 5min，95° 40s，68° 8 min 30循环，72° 10min，25°保存。也试过梯度pcr，将退火温度每一个循环提高0.1度，结果以前有的非特异性条带都没有了，十分干净的没东西。求大神指导 |
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uulovelyuu
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2楼2015-12-21 11:06:40
3楼2016-01-11 17:17:41
4楼2016-01-11 19:53:00
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5楼2016-01-11 21:41:12
原来，是这样
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