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用基因组dna扩增长度约为7.8kb的片段,一直扩不出来,求助 已有4人参与
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| 用过GC buffer,出现许多非特异性条带,分成两段扩过,后面一段扩出来了,前面的一段扩不出来。由于是要构建载体用的,已经加了酶切识别的引物接头,扩了好多天了,试过两步法:95° 5min,95° 40s,68° 8 min 30循环,72° 10min,25°保存。也试过梯度pcr,将退火温度每一个循环提高0.1度,结果以前有的非特异性条带都没有了,十分干净的没东西。求大神指导 |
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uulovelyuu
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原来,是这样
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