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一粒儿糖

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白挂不上柱子 已有6人参与

求大神指点,蛋白纯化了一个月了,还是没有出来,蛋白是多聚体,表达在上清里,表达量还可以,蛋白等电点4.7上下,镍柱挂不上,q柱和Sp柱,疏水柱也挂不上,q柱流穿里有,但是量少,硫酸铵沉淀是复溶后上清里量也很少
Q柱2
缓冲液Tris-HCl
Ph:8.0   20mM  Tris-HCl
电导:1.53
蛋白:
Ph:8.0   20mM Tris-HCl
电导:1.3


sp柱
缓冲液PB
Ph:6.56  20mM PB
电导:1.89
蛋白
Ph:6.56  
电导:1.57
1ml蛋白+4ml H2O
洗脱:500mMNaCL+20mMPB
1MNaCL+20mMPB
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liaohongjun

铁虫 (小有名气)

Q柱,降低上样流速!检查样品pH,电导是否与平衡缓冲液一致!SP柱平衡缓冲液pH都已经高于目标蛋白等电点了!肯定挂不上去!

发自小木虫Android客户端
2楼2017-03-23 11:47:36
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fexcths

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
“表达在上清里,表达量还可以”从这句我大概判断出你这是工程菌表达的。那么请确认你的的载体蛋白,因为NI柱是纯化含有HIS标签的蛋白的。 如果是含HIS标签的蛋白,那么你挂不上ni柱可能是有两点:一是buffer,这需要你多多尝试,二是柱效不行了,这就需要你做一下再生了
3楼2017-03-24 09:23:35
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fexcths

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

链接: https://pan.baidu.com/s/1qY0Mpoo 密码: what 希望对你有用。
4楼2017-03-24 09:42:34
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
问题太笼统,问题是啥,上样速度,平衡柱子,上样等等。多大柱子
5楼2017-03-24 11:26:01
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yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你得看看是不是带标签,才去挂镍柱啊。最好把你的电泳图贴一个看看,分子大小?多聚体是几聚,其等电点可能不是理论那个值了
6楼2017-03-24 13:01:29
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chen_b_hua

新虫 (初入文坛)

换下填料试试
7楼2017-04-22 18:17:39
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张木0000

木虫 (正式写手)

8楼2017-05-10 21:53:43
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张木0000

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 张木0000 at 2017-05-10 21:53:43
只知道你的

只知道你的SP是有问题,想要挂上强阳离子交换,蛋白要带正电啊~

发自小木虫Android客户端
9楼2017-05-10 21:55:58
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张木0000

木虫 (正式写手)

疏水层析挂不上可能是你的硫酸铵浓度不够~

发自小木虫Android客户端
10楼2017-05-10 21:59:27
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